[发明专利]利用PRSS2基因作为乳蛋白含量分子标记的检测方法

摘要

本发明公开了一种利用PRSS2基因作为乳蛋白含量分子标记的检测方法，具体为：第一步；采取牛的血液进行全基因组DNA的提取，利用琼脂糖凝胶电泳的方法，检查DNA的质量；第二步：以全基因组DNA为模板，以引物A为引物进行PCR扩增牛PRSS2基因片段；第三步：用全基因组DNA进行混池PCR，找到多态性的位点，第四步：对单个样品进行测序，根据测序结果进行多态性关联分析；有益效果：发现了5个SNP位点与牛的乳品质中乳蛋白性状的相关性。提供了一种简单，快速的在DNA水平上筛查和检测与牛乳品质性状密切相关的遗传标记，可应用于牛的分子育种。解决了SSCP、PCR—PFLP技术的繁琐性，提高了准确性和精确度。

主权项

1.一种利用PRSS2基因作为乳蛋白含量分子标记的检测方法，其特征在于：其具体方法如下：第一步；采取牛的血液进行全基因组DNA的提取，利用琼脂糖凝胶电泳的方法，检查DNA的质量；第二步：以全基因组DNA为模板，以引物A为引物进行PCR扩增牛PRSS2基因片段；引物A为F：5‘GCCCTTGACATTCCTACACG 3’；R：5‘CGTAGCCCCAGGACACAAT 3’；第三步：用全基因组DNA进行混池PCR，找到多态性的位点，PCR的反应程序为：95℃预变性5min；95℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸45s，35个循环；延伸72℃10min，最后16℃保存；第四步：对单个样品进行测序，根据测序结果进行多态性关联分析：根据PRSS2引物对A的PCR测序结果，找到5个SNP位点分别是PRSS2基因第3内含子SNP 1，即：I3‑265G>A突变位点，PRSS2基因第4外显子SNP 2，即：E4‑31A>T突变位点，PRSS2基因第4外显子SNP 3，即：E4‑68G>A突变位点，PRSS2基因第4外显子SNP 4，即：E4‑78G>C突变位点，PRSS2基因第4内含子SNP 5，即：I4‑160T>C突变位点。