[发明专利]一种阿达木单抗的阳离子交换色谱纯化方法

摘要

本发明公开了一种阿达木单抗的阳离子交换色谱纯化的方法，通过在CEX多步洗脱过程中添加尿素和甜菜碱类表面活性剂将包含抗体和污染物的混合物中的污染物去除，使多聚体与抗体分离，随后进行疏水作用层析，污染物分离效果好；层析过程样品调节简单，避免了pH值的剧烈变化，最终纯化产物中多聚体含量显著降低。

主权项

一种阿达木单抗的阳离子交换色谱纯化方法，包括对CHO细胞发酵表达的阿达木单抗发酵液进行阳离子交换色谱洗脱、疏水作用色谱洗脱，其特征在于，包括以下步骤：1)将CHO细胞发酵表达后菌液分离；2)将发酵液用水稀释，调节pH至6.00±0.10；3)过阳离子交换柱，用pH 5.5‑6.5、含有0.1‑0.5mol/L尿素的缓冲液进行第一次洗脱，然后用pH 5.5‑6.5、含有质量分数0.1％‑1.0％的甜菜碱类表面活性剂的缓冲液进行第二次洗脱，收集洗脱组分；4)将收集的组分通过疏水作用色谱洗脱，所述的疏水作用色谱洗脱分为2步洗脱，其中，第一步洗脱的洗脱液为pH5.5‑6.5、0.15‑0.4mol/L(NH4)2SO4的PBS缓冲液，第二步洗脱的洗脱液为pH5.5‑6.5的PBS缓冲液，收集洗脱组分。其中，步骤3)所述的甜菜碱类表面活性剂选自十二烷基二羟乙基甜菜碱、十八烷基二羟乙基甜菜碱或椰油酰胺丙基甜菜碱。