[发明专利]高产细菌素的副干酪乳杆菌基因工程菌株的构建方法在审
| 申请号： | 201610157858.8 | 申请日： | 2016-03-18 |
| 公开（公告）号： | CN105755031A | 公开（公告）日： | 2016-07-13 |
| 发明（设计）人： | 葛菁萍;高冬妮;孙艳阳;王洋;李兴霖;纪晓磊;杨睿睿;平文祥 | 申请（专利权）人： | 黑龙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/74 | 分类号： | C12N15/74;C12N15/54;C12N1/21;C12R1/225 |
| 代理公司： | 哈尔滨市文洋专利代理事务所(普通合伙) 23210 | 代理人： | 何强 |
| 地址： | 150080 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | 高产细菌素的副干酪乳杆菌基因工程菌株的构建方法，涉及一种副干酪乳杆菌基因工程菌株的构建方法。本发明是要解决现有副干酪乳杆菌的细菌素产量低的问题。方法：一、从副干酪乳杆菌HD1.7中扩增prcK基因；二、构建质粒pMD18‑T‑prcK；三、构建重组过表达载体pRSFDuet‑1‑prcK；四、构建重组过表达载体pRR‑tet；五、将过表达载体pRR‑tet电转化副干酪乳杆菌HD1.7感受态细胞；六、prcK基因过表达突变株的筛选和鉴定。该基因工程菌株的抑菌能力比原始菌株提高了17.86％。传代后发酵液细菌素效价2373.46±46.27AU/mL，传代后效价比较稳定。本发明用于产细菌素。 | ||
| 搜索关键词： | 高产 细菌 干酪 杆菌 基因工程 菌株 构建 方法 | ||
【主权项】：
高产细菌素的副干酪乳杆菌基因工程菌株的构建方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：一、从副干酪乳杆菌HD1.7中扩增prcK基因；二、将prcK基因与pMD18‑T载体连接构建质粒pMD18‑T‑prcK；三、以表达质粒pRSFDuet‑1为骨架，向质粒上的多克隆位点插入目的基因prcK，构建重组过表达载体pRSFDuet‑1‑prcK；四、以表达质粒pRSFDuet‑1‑prcK为骨架，向质粒上的多克隆位点插入目的基因tet，构建重组过表达载体pRK‑tet；五、将过表达载体pRK‑tet电转化副干酪乳杆菌HD1.7感受态细胞；六、prcK基因过表达突变株的筛选和鉴定。
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