[发明专利]一种预防天女木兰芽组培褐化的培养基配方及方法

摘要

本发明涉及一种预防天女木兰芽组培褐化的培养基配方及方法。包括外植体的灭菌、无菌苗获得培养基、继代培养基、生根培养基和移栽五个步骤。培养方法采用芽作为外植体，在B5培养基中添加细胞分裂素、生长素、维生素C、谷胱甘肽、苯甲酸钠、蔗糖和琼脂构成预防褐化培养基配方，实现了天女木兰组培过程中褐化的防控。本方法重复性好，芽褐化率低于10％，生根率75％～80％，移栽成活率85％～90％，对于保护天女木兰种质资源及其开发利用具有重要意义。

主权项

一种预防天女木兰芽组培褐化的培养方法，其特征包括以下步骤：（1）取材：于春季和夏初取顶芽和侧芽，芽长度为0.5～1.0cm，放入洗洁精溶液中浸泡20min，流水冲洗2h，然后在超净工作台上用质量分数为75%的乙醇对其表面消毒30s，用无菌水冲洗2～3次，然后用0.1% HgCl2处理7～8min，用无菌水冲洗5～6次，接种；（2）无菌苗获得：将经步骤（1）消毒后的芽，接种于培养基中培养，培养基为：在B5培养基中添加细胞分裂素6—苄基腺嘌呤 0.5mg/L、生长素萘乙酸0.3mg/L、维生素C 300～500mg/L、谷胱甘肽100～150mg/L、苯甲酸钠30～50mg/L和蔗糖30g/L，调pH 5.6～5.8，光照时间12h，培养温度白天23±2°C，夜晚20±2°C，光照强度 1500～2000lx，培养30d，得无菌苗，褐化率小于10%；（3）继代培养：将步骤（2）得到的无菌苗接种于继代培养基中培养，继代培养基为：在B5培养基中添加细胞分裂素噻苯隆0.3mg/L、萘乙酸0.3 mg/L、维生素C 300～500mg/L、谷胱甘肽100～150 mg/L、苯甲酸钠30～50 mg/L、蔗糖3g/L和琼脂7g/L，调pH 5.6～5.8，光照时间12h，培养温度白天23±2°C，夜晚20±2°C，光照强度1500 ～2000lx，培养40～50d，获丛生芽，褐化率小于10%；（4）生根培养：将步骤（3）获得的丛生芽分切成单芽进行生根培养，生根培养基为：在1/2 B5培养基中添加萘乙酸0.5mg/L、维生素C 300mg/L、谷胱甘肽50mg/L、苯甲酸钠30mg/L、活性炭500 mg/L、蔗糖3g/L和琼脂7g/L，调pH 5.6～5.8，光照时间12 h，培养温度白天23±2°C，夜晚20±2°C，光照强度1500～2000lx，培养40～50d生根，生根率75～80％，褐化率小于10%；（5）炼苗移栽：将获得的生根试管苗的培养瓶盖打开，在培养室内放置3d后，用镊子将组培苗取出，洗去粘附在根部的培养基，在温室内移栽至苔藓与蛭石体积比为1：1的基质中，移栽前将基质用质量分数为0.3％高锰酸钾溶液喷洒消毒；移栽后温度保持在18～20゜C，相对湿度在85～90％，炼苗过程中逐渐增强光照强度，两周后长出新不定根、新叶，移栽成活率85％～90％。