[发明专利]一种裸鼹鼠皮层神经元培养方法

摘要

本发明涉及细胞生物学技术领域，特别涉及一种裸鼹鼠皮层神经元的分离纯化和培养方法。本发明综合使用多种培养基从新生裸鼹鼠大脑皮层分离并纯化培养皮层神经元，摸索出了适于变温的啮齿类哺乳动物裸鼹鼠皮层神经元的合理培养方法。本发明方法能够简便、高效、经济的获得大量功能活性正常的裸鼹鼠皮层神经元，低氧条件下的培养能够保证这种细胞在离体环境中依然能够保持在体状态下的生物学特性，从而便于直接在纯净的体外细胞培养模型中进一步研究裸鼹鼠皮层神经元的特殊生理功能，从而为探索其中的生物学机制并应用于临床相关领域提供重要的理论依据。

主权项

1.一种裸鼹鼠皮层神经元培养方法，包括以下步骤：A、收集裸鼹鼠皮层混合神经细胞：分离65‑70天的胚胎裸鼹鼠大脑皮层组织，将大脑皮层组织剪碎，加入组织消化液混匀之后，于35‑37℃消化15‑30分钟；然后用混合神经细胞培养基终止消化，离心去除上清之后，在混合神经细胞培养基中将沉淀重悬并吹打成单细胞悬液；将单细胞悬液种于无菌且预先包被有基质层的培养板中；B、裸鼹鼠大脑皮层混合神经细胞的培养：将步骤A得到的混合神经细胞，用混合神经细胞培养基培养于三气培养箱中培养6‑10个小时，待其完全贴壁之后，更换为神经元纯化培养基继续培养2‑4天，然后将培养基更换为神经元维持培养基继续培养2‑4天，如此为一个循环，培养2‑4个循环；所述的混合神经细胞培养基为含有体积百分数为10％胎牛血清的低糖DMEM；所述的神经元纯化培养基为含有10μM 5‑氟尿嘧啶的Nerobasal培养基并添加体积分数为2％的B27；所述的神经元维持培养基为含有体积百分数为2％B27的Neurobasal培养基，同时添加100ng/ml NGF；所述的三气培养箱的参数设置为：温度控制在35±2℃，氧浓度为5％，二氧化碳浓度为5±1％，湿度为96±2％。