[发明专利]万寿菊细胞培养生产游离叶黄素的方法

摘要

万寿菊细胞培养生产游离叶黄素的方法，涉及植物细胞培养技术。按照下述步骤进行：(1)外植体诱导产生愈伤组织细胞；(2)经筛选建立万寿菊愈伤组织细胞系；(3)高产游离叶黄素的悬浮细胞培养系的建立；(4)悬浮细胞扩大培养用于游离叶黄素的生产；(5)细胞中游离叶黄素的提取和产率测定。本发明为一种生产叶黄素的新方法，能够连续生产，不受季节和外界环境的限制，可为临床药用提供新的来源；所获得的细胞产物直接为游离叶黄素，而非叶黄素酯，省去下游皂化反应步骤；细胞产物成分简单，杂质少，易于下游叶黄素的分离、纯化。

主权项

1.万寿菊细胞培养生产游离叶黄素的方法，其特征在于按照下述步骤进行：（1）将来自万寿菊植株的外植体清洗干净、灭菌，接种于愈伤组织诱导培养基上，诱导产生愈伤组织细胞；步骤（1）中所述的外植体为新鲜万寿菊花的花瓣；（2）愈伤组织细胞在同样组成的培养基中连续传代增殖 培养，经筛选建立细胞形态均一、生长稳定的万寿菊愈伤组织细胞系；步骤（2）中所述的筛选具体是指，每次传代时选取收获细胞中30%～50%，形态疏松的、浅黄色愈伤组织细胞作为种子进行继代培养；筛选过程至少持续10代，直至所获得的细胞均为形态疏松的，颜色为浅黄色，生长稳定，建立愈伤组织细胞系；（3）将步骤（2）筛选得到的万寿菊愈伤组织细胞系转入液体培养基中进行摇瓶悬浮培养，筛选并建立稳产、高产游离叶黄素的万寿菊悬浮细胞培养系；步骤（3）中所述的筛选具体是指，每次传代时选取收获细胞中30%～50%，分散性好、呈深绿色的细胞作为种子细胞进行继代培养，除去坚硬的细胞团以及呈褐色或者白色的细胞；筛选过程至少持续10代，直至所获得的细胞均为分散性好，形态为单细胞状态、非细胞团，颜色为深绿色，建立悬浮细胞培养系；（4）将稳产、高产游离叶黄素的万寿菊悬浮细胞接种到同样组成的新鲜液体培养基中扩大培养，进行游离叶黄素的生产；（5）培养细胞冷冻干燥后用有机溶剂浸提，然后测定游离叶黄素的产率。