[发明专利]测定肝微粒体中虫草素代谢物的液质联用方法

摘要

本发明属于医药检测技术领域，公开测定肝微粒体中虫草素代谢物的液质联用检测方法，具体为一种分析测定肝微粒体中虫草素代谢物的液质联用检测方法。本发明方法主要包括以下步骤(1)虫草素的肝微粒体温孵培养(2)样品的预处理(3)样品分析，通过液质联用方法进行肝微粒体中虫草素代谢物的测定。本发明的优点在于操作简便，样品处理简单、分析速度快、特异性强、灵敏度高。为研究虫草素在肝微粒体中的体外代谢产物提供技术支持，同时为研究虫草素的体内外代谢研究奠定方法学基础，具有重要意义。

主权项

测定肝微粒体中虫草素代谢物的液质联用方法，其特征在于，包括以下步骤：1)虫草素肝微粒体的温孵培养在培养瓶中加入肝微粒体、NADP、NADH、G‑6‑P、G‑6‑P DH以及MgCl2后，补加三(羟甲基)氨基甲烷盐酸缓冲液配成肝微粒体孵育体系；在37℃全温振荡器温孵2‑5min，再定量加入虫草素的三(羟甲基)氨基甲烷盐酸缓冲液，开始反应，30min后将培养瓶从全温振荡器中取出，迅速加入冷的有机溶剂A终止代谢反应，得温孵产物；2)样品处理将温孵产物涡旋振荡30s，5000r/min离心10min，准确吸取上清液，在氮气下吹干后得残留物；残留物用甲醇复溶，涡旋振荡后，5000r/min离心10min，吸取上清液，上清液过0.22μm微孔滤膜后，进样10μL，进行液质检测；3)样品分析进行肝微粒体中虫草素代谢物测定，具体条件如下：色谱条件：色谱柱：DiamonsilTM ODS C18；流动相：甲醇:水＝15:85；洗脱时间：t＝32min；进样量：10μL；检测波长：λ＝260nm；柱温：30℃；流速：0.5mL/min；质谱条件：一级质谱：电离模式：电喷雾电离(ESI)；扫描模式：正离子扫描；电喷雾电压：4.0bar；干燥气流速：10L/min；干燥气温度：200℃；二级质谱：电离模式：电喷雾电离(ESI)；扫描模式：正离子扫描；碰撞气：氮气；毛细管电压：2.8kV；锥孔电压：3.0V；源温度：110℃；脱溶剂温度：350℃；脱溶剂气体流量：10L/min；碰撞能量：15‑25eV。