[发明专利]大肠癌唾液蛋白指纹图谱分子诊断模型建立方法

摘要

本发明公开了一种大肠癌唾液蛋白指纹图谱分子诊断模型建立方法，包括以下步骤：样品收集；纳米磁珠预处理；样品预处理；唾液样品洗脱上样；质谱分析；数据采集；数据分析；建立诊断模型。本发明将WCX与MALDI‑TOF‑MS技术相结合，进一步探索肠癌患者唾液差异表达蛋白，发现了312个肠癌差异蛋白质峰，其中有37个差异蛋白质峰有统计学意义。选取m/z为2501.26、4779.95、3140.39建立肠癌组与正常对照组的判别模型，该模型的灵敏度和特异度均高，采用十字交叉验证，灵敏度和特异度分别为85％、88％，可见该模型对肠癌的诊断具有一定的价值。

主权项

1.一种大肠癌唾液蛋白指纹图谱分子诊断模型建立方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)样品收集，分别收集肠癌组和正常对照组的唾液样品；(2)纳米磁珠预处理；(3)样品预处理：取出冷冻保存的唾液样品，冰上解冻，所有唾液样品均1次冻融，取5μl所述唾液样品加入10μl的U9裂解液，混合孵育30min后，加入185μl的Wash Buffer稀释；(4)唾液样品洗脱上样：③向每个装有纳米磁珠的PCR管中分别加入100μl预处理后的所述唾液样品，混匀，置于室温孵育30min，将所述PCR管置于磁铁上孵育1min，去除上清液；④每管加入100μl的Wash Buffer洗脱5min，然后将所述PCR管置于磁铁上孵育1min，去除上清液；再重复步骤④操作一次；⑤在所述PCR管中加入10μl的Elution Buffer洗脱5min，将所述PCR管置于磁铁上孵育1min，取5μl上清液移至另一个PCR管中；⑥将装有5μl上清液的PCR管中加入5μl的CHCA饱和溶液，充分混匀，至样品颜色发灰，而没有明显的沉淀时，取2μl混合溶液，加样到Au/Steel芯片上，晾干后放入仪器读取；(5)质谱分析：采用质谱仪读取所述Au/Steel芯片信息，设置激光强度为190，灵敏度为5；(6)数据采集；(7)数据分析，找出所述肠癌组和所述正常对照组之间具有统计学意义的差异表达蛋白质峰；设置P＜0.05，并选取所述肠癌组和所述正常对照组蛋白质质谱数据比值＞3的差异表达蛋白质峰，所述肠癌组和所述正常对照组之间具有统计学意义的差异表达蛋白质峰有37个，其中有30个差异表达蛋白质峰表达下调，7个差异表达蛋白质峰表达上调，所述37个差异表达蛋白质峰具体如下：(8)建立诊断模型：用Biomarker Pattern Software 5.0.2采用决策树算法计算出多个变量变化对两样本的判别价值，确定最佳的诊断模型。