[发明专利]一种包含喜树碱的层层自组装纳米靶向载体的制备方法

摘要

本发明公开了一种包含喜树碱的层层自组装纳米靶向载体的制备方法，所述方法以羟基喜树碱（HCPT）为模型药物，以天然无毒可降解生物材料壳聚糖为基础材料，利用甘草次酸受体介导的肿瘤主动靶向技术，制备能够响应肿瘤组织及肿瘤细胞特殊的氧化还原和pH环境的层层自组装纳米粒子。该方法制备的靶向纳米囊单分散性高，囊壁厚度和空腔体积可控，纳米囊具有还原响应性，可以针对肿瘤细胞的微环境控制释放内腔的抗肿瘤药物，可作为抗肿瘤药物的靶向运输工具，在肿瘤的靶向治疗领域具有很大的应用前景。

主权项

1.一种包含喜树碱的层层自组装纳米靶向载体的制备方法，其特征在于所述方法步骤如下：a、还原敏感性壳聚糖衍生物制备：（1）以ε‑己内酯为单体，苯甲醇为引发剂，加入Sn（Oct）2，控制ε‑己内酯、苯甲醇以及Sn（Oct）2的质量比为50：5～10：0.5～1，在N2环境中80～120℃条件下不断搅拌，持续反应12～48 h，获得PCL‑OH；（2）将0.8～1.6 g PCL‑OH 加入到10 mL 二氯甲烷溶液中，另将0.8～1.6 g 对硝基苯基氯甲酸酯溶于10 mL 二氯甲烷，将两溶液混合，室温下反应12～48小时生成PCL‑NPC；（3）将0.5～1 g胱氨和1～4 mL三乙胺溶于20 mL甲醇中，10～30 min之后，将10 mL Boc2O甲醇溶液缓慢滴加到上述溶液中，N2环境室温条件下反应6～12小时生成Cys‑Boc‑Mono；（4）将0.4～0.8 g PCL‑NPC、0.2～0.4 g Cys‑Boc‑Mono和0.4～0.8 mL三乙胺溶于二氯甲烷中，N2环境室温条件下反应12～48小时生成PCL‑Cys‑Boc‑Mono，去保护后生成PCL‑Cys‑NH2；（5）将0.4～0.8 g PCL‑Cys‑NH2和0.4～0.8 g 壳聚糖分散到30～50 ml 四氢呋喃中，N2环境室温条件下反应12～24小时后加入0.1～0.5甘草次酸、0.1～0.5 g EDC·HCl 和0.1～0.5 g NHS，N2环境室温条件下，继续反应12～24小时，反应结束后，用乙醇清洗数遍，离心获得还原环境敏感的PCL‑SS‑壳聚糖‑甘草次酸聚合物；b、载喜树碱磷酸钙纳米颗粒制备：（1）取10 mg 喜树碱和20～40 mg的氯化钙溶于1 mL蒸馏水中混合均匀；（2）取80～120 mg的磷酸氢二钠溶于1 mL蒸馏水中混合均匀；（3）取环己烷、己醇、Trion‑X100于烧杯中充分搅拌，其体积比为3：1～3：3～5；（4）分别取10 mL（3）中的混合液放入小烧杯中标记为A和B，在A中加入80～120 μL上述氯化钙和喜树碱混合液，在B中加入80～120 μL上述磷酸氢二钠溶液；将B溶液缓慢滴加到A中，反应2～4 h，加入10～20 mL乙醇破乳，用蒸馏水清洗；c、组装一层样品制备：取0.1 g PCL‑SS‑壳聚糖‑甘草次酸聚合物溶于10～20 mL 醋酸缓冲液，不断搅拌，滴加1～2 mL 载喜树碱磷酸钙纳米颗粒分散液，持续搅拌20～40 min，用醋酸缓冲液洗涤，离心获得组装一层样品；d、组装两层样品制备：取2 g ι‑卡拉胶加入到含有10～20 mL 醋酸溶液的三口瓶中，在60～80℃下搅拌至ι‑卡拉胶完全溶解；不断搅拌，滴加1～2 mL组装一层样品分散液，持续搅拌20～40 min，用醋酸缓冲液洗涤，离心获得组装两层样品；e、利用c或d方法交替组装壳聚糖衍生物与ι‑卡拉胶，得到多层纳米靶向载体。