[发明专利]一种固定化右旋糖酐酶降解小分子右旋糖酐的制备方法

摘要

本发明公开了一种固定化右旋糖酐酶降解小分子右旋糖酐的制备方法，属于右旋糖酐领域。本发明先得发酵培养基，将棘孢青霉菌和醋杆菌接在培养基上发酵培养得菌体，再超声破碎后得菌液，将菌液和卡拉胶混合滴加到氯化钙溶液中，制得右旋糖酐酶固定化细胞微球，将微球转接至底物溶液中摇床反应，反应后用乙醇沉淀，捏洗干燥后即可本发明将棘孢青霉菌和醋杆菌发酵得菌体，里，面含有右旋糖酐酶，并利用卡拉胶进行固化，固定化率高而且提高右旋糖酐酶的活性和稳定性，用其降解右旋糖酐，可使其分子量降低，副产物少，提高右旋糖酐的质量。

主权项

一种固定化右旋糖酐酶降解小分子右旋糖酐的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：（1）按重量份数计，分别选取30～40份葡萄糖，10～15份蛋白胨，5～8份磷酸氢二钠，2～4份磷酸二氢钾，0.5～1.2份氯化钾，3～5份酵母浸膏和30～50份去离子水，用0.5mol/L氢氧化钠溶液调节pH值为7.0，在105～110℃和0.1MPa下灭菌处理10～15min得发酵培养基；（2）向上述发酵培养基中加入培养基体积8～12%棘孢青霉菌种子液和培养基体积10～15%醋杆菌种子液，放入37℃恒温摇床培养中，在200～220r/min下培养15～20h，将培养后的发酵液在4℃和5000～7000r/min转速下离心分离12～15min，收集沉淀物，将沉淀物按固液比1:2加入去离子水，得菌体悬浮液；（3）将上述菌体悬浮液按体积比1:1加入pH6.8浓度0.05mol/LHAC‑NaAC缓冲液，混合后在0℃和250～300W下超声破碎15～20min，每破碎2s，间隔2s，超声破碎后再在4℃和10000～12000r/min条件下离心分离15～20min，去除沉淀物，得上清液即菌液；（4）取50～80mL质量分数3～5%卡拉胶溶液，将卡拉胶溶液和菌液按体积比1:1混合，将混合液缓慢滴加到质量分数5～8%的氯化钙溶液中，控制在50～60min滴完，滴加同时在250～350r/min转速下搅拌，滴加后再搅拌固定25～35min，固定后加入总体积5～8%戊二醛进行交联1～2h，形成卡拉胶钙珠，将卡拉胶钙珠按固液比1:5放入pH6.5磷酸盐缓冲液中静置过夜，过滤，将过滤物用蒸馏水洗涤2～3次，即可得到右旋糖酐酶固定化细胞微球；（5）将上述右旋糖酐酶固定化细胞微球按体积5～10%转接量接至底物溶液中，在27℃和100～150r/min恒温摇床中反应18～20h，反应结束后用质量分数80%乙醇按体积比3:1混合进行沉淀，将沉淀物放入质量分数90%乙醇中捏洗2～3次，捏洗后的过滤物放入烘箱中在70～80℃下干燥5～6h即可。