[发明专利]一种快速检测肿瘤相关小肽MUC1的方法

摘要

本专利公开了一种快速检测肿瘤相关小肽MUC1的方法，涉及荧光探针检测技术领域。利用适配体与目标小肽特异性识别的特点，设计特殊适配体序列，从而达到目标物特异性识别的目的；通过结合两种发卡结构探针的杂交反应完成信号放大的策略，从而实现目标小肽的灵敏检测。本方法包括探针预变性‑混合反应‑背景猝灭‑荧光检测等四个步骤，操作简便快速，省时省力，为肿瘤相关小肽MUC1的检测提供一种新的方法。

主权项

1.一种适配体序列在制备小肽MUC1快速检测试剂中的应用，其特征是包括以下步骤：（1）探针预变性首先，羧基荧光素FAM标记的发卡探针1、发卡探针2，适配体在95 ºC下分别孵育0.5 h；将这三种溶液在室温条件下放置1 h；其中羧基荧光素FAM标记的发卡探针1，序列为AGTAGGTTGTATAGTTCAAAGTAACTATACAACCTACTACCTCA；羧基荧光素FAM标记的发卡探针2，序列为ACTTTGAACTATACAACCTACTTGAGGTAGTAGGTTGTATAGTT；适配体，英文名称为aptamer，序列为TGAGGTAGTAGGTTGTATAGTTGCAGTTGATCCTTTGGATACCCTGGAACTATACAACCTACTACCTCA；（2）混合反应以下步骤进行的总反应混合液体积为200 µL，不同浓度的粘蛋白MUC1与一定浓度的发卡探针1和发卡探针2以及浓度为5 nM的适配体混合于缓冲溶液中，混合溶液在25 ºC下反应1 h；缓冲溶液的成分为浓度为0.75 M的氯化钠和50 mM的磷酸氢二钠，pH值为7.4；（3）背景猝灭向所述步骤（ 2 ） 中得到的混合溶液加入浓度为0.5 mg/mL氧化石墨烯溶液，室温下孵育0.5 h；（4）荧光检测荧光检测的实验参数如下：激发波长为480 nm，发射波长范围为500‑650 nm。