[发明专利]浮萍室内培养与繁殖的方法

摘要

本发明提供了一种浮萍室内培养与繁殖的方法，包括以下步骤：将浮萍去根、灭菌后，置于Hoagland`s E+培养基中培养；选择培养后的一簇单克隆浮萍，在无菌环境下转接至无菌培养液中，继续培养。本发明提供了一种可操作的、实现浮萍在室内自然培养的方法，可为风险评价试验提供高质量的生物试材，有利于浮萍生物毒性试验的顺利开展。

主权项

1.一种浮萍室内培养与繁殖的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)选择体积为30L，长×宽×高＝5cm×3cm×2cm的方形玻璃缸作为浮萍的养殖缸，使用前用2mg/L高锰酸钾溶液浸泡养殖缸30min，再用清水冲洗干净；(2)在洗净的养殖缸内放置Hoagland`s E+培养基，控制养殖缸内的液面高度为10cm；使用的Hoagland`s E+培养基，其配方为：Ca(NO3)2·4H2O 1.18g/L；KNO3 0.51g/L；MgSO4·7H2O 0.49g/L；KH2PO4 0.14g/L；H3BO3 2.86mg/L；MnCl2·4H2O 1.81mg/L；ZnSO4·7H2O 0.22mg/L；CuSO4·5H2O 0.08mg/L；H2MoO4·H2O/Na2MoO4·2H2O 0.02/0.03mg/L；FeEDTA溶液2mL/L；所述FeEDTA溶液的制备方法为：取2.78g的七水硫酸亚铁和3.73g的乙二胺四乙酸二钠(EDTA‑Na2)，用蒸馏水定容至500mL，配制成FeEDTA溶液；(3)在野外使用1L烧杯及孔径为2mm的抄网于田间采集健康的浮萍，用清水冲洗干净，再刀片去根得到去根浮萍；(4)将去根浮萍用0.1％次氯酸钠浸泡灭菌1min，然后用清水冲洗灭菌后的浮萍3次；(5)将经过步骤(4)灭菌后的去根浮萍置于步骤(2)的含Hoagland`s E+培养基的养殖缸中培养，控制浮萍的培养密度为20叶/缸，培养温度为24±2℃，光照强度为8000Lux±200Lux，光照时间为16h，黑暗时间为8h；培养过程中，每5天更换一次Hoagland`s E+培养基；所述含Hoagland`s E+培养基用HCl和KOH调整Hoagland`s E+培养基pH为7.0；(6)按照步骤(5)的培养方法培养一个月后，从养殖缸中随机选取4片浮萍，在无菌环境下转接至含100mL的无菌Hoagland`s E+培养基的组织培养瓶中；组织培养瓶的体积为250mL，控制培养温度为24±2℃，光照强度为8000Lux±200Lux，光照时间为16h，黑暗时间为8h；培养过程中，每2天更换一次培养基，共设3个重复，每天统计叶片总数，周期为7天；所述无菌Hoagland`s E+培养基pH为7.0。