[发明专利]一种右旋糖酐酶冻干粉的工业化生产方法

摘要

本发明涉及一种右旋糖酐酶冻干粉的工业化生产方法，属于生物技术领域。本发明经过对菌株发酵培养后灭活；通过0.5mm孔板过滤器过滤；获得的料液经过带式过滤机后送入超滤膜循环罐，接着清液进入纳滤膜储罐，然后物料进入纳滤液储罐；料液经过0.45um液体过滤器、0.22um液体过滤器两组除菌过滤器进行除菌过滤，料液进入冻干机的冻干盘；进行冻干、升华干燥处理；混合；用真空包装机进行包装，得到右旋糖酐酶冻干粉。本发明中右旋糖酐酶的酶活总收率达到80‑83％之间，冻干粉的酶活单位大约在10万‑15万之间，实现了右旋糖酐酶大工业化的生产。

主权项

一种右旋糖酐酶冻干粉的工业化生产方法，步骤如下：(1)一代斜面的制备将菌株接种到一代斜面培养基上进行一代斜面培养，在28℃，湿度为40‑60％的条件下培养6‑7天；(2)二代斜面的制备将一代斜面培养基上活化的菌株接种到二代斜面培养基上进行二代斜面培养，在28℃，湿度为40‑60％的条件下培养6‑7天；(3)种子培养将二代斜面培养的菌株制作菌悬液，按1.5‑2％(体积比)的量接种入种子培养基中，开启搅拌转速80转/min、在27‑29℃条件下培养30‑40h；(4)发酵培养将种子液按1.5‑2％(体积比)的量接种入发酵培养基中，在27‑29℃，转速为80转/min的条件下培养85‑100h。培养基一代斜面培养基：蔗糖1.5g、马铃薯20g、琼脂2g，加水定容至100mL。二代斜面培养基：蔗糖1.5g、马铃薯20g、琼脂2g，加水定容至100mL。种子培养基：酵母浸粉5‑10g/L,磷酸氢二钾2‑4g/L，硫酸镁0.2‑0.5g/L,氯化钾0.1‑0.3g/L，右旋糖酐大分子1000 10‑15g/L，硫酸亚铁0.005‑0.01g/L，甜菜碱消沫剂0.001‑0.005g/L，磷酸氢二钠0.005‑0.01g/L，其余为自来水。发酵培养基：酵母浸粉10‑15g/L,磷酸氢二钾2‑4g/L，硫酸镁0.2‑0.5g/L,氯化钾0.1‑0.3g/L，右旋糖酐大分子1000 10‑15g/L，硫酸亚铁0.005‑0.01g/L，甜菜碱消沫剂0.01‑0.05g/L，磷酸氢二钠0.005‑0.01g/L，其余为自来水；(5)发酵培养结束，检测发酵液的单位酶活，利用蒸汽通过盘管将发酵液加温到60℃，进行灭活；(6)经过灭活的发酵液，通过0.5mm孔板过滤器，过滤液进入发酵液储罐；(7)发酵液经过0.5mm孔板过滤器过滤后，再通过带式过滤机；(8)料液经过带式过滤机后送入超滤膜循环罐内的物料通过膜的保安过滤器，进入超滤膜，接着清液进入纳滤膜储罐；(9)在纳滤膜储罐中料液通过膜的保安过滤器进入纳滤液储罐；(10)在纳滤液储罐中的料液经过0.45um液体过滤器、0.22um液体过滤器两组除菌过滤器进行除菌过滤，料液进入冻干机的冻干盘；(11)用螺杆真空冷冻干燥机冻干机进行冻干、升华干燥处理。冻干机装入288个300mm×300mm×12mm的冻干盘；每个装量的厚度为9.5±0.5mm，总装量在246L；冻干时的参数设定为：温度降至负46℃时开始计算冻干时间，控制负47±1℃维持15‑16小时；结束后将温度升至负30.5±0.5℃，维持150‑180min；再次将温度升高到负20.5±0.5℃，维持120‑150min；后将温度升至负10.5±0.5℃，维持120‑150min；再次将温度升高到负0.5±0.5℃，维持120min；再次将温度升高到9.5±0.5℃，维持120‑150min；再次将温度升高到负19.5±0.5℃，维持180min；再次将温度升高到负29.5±0.5℃，维持13‑14小时；升华完毕停机出料；(12)收集的物料进入500L无菌药品混合机，开机120min进行混合；(13)用真空包装机进行包装，得到右旋糖酐酶冻干粉。