[发明专利]一种禽网状内皮增生症病毒亚单位疫苗注射复合物及其制备方法

摘要

本发明涉及生物免疫领域，提供了一种禽网状内皮增生症病毒(REV)亚单位疫苗注射复合物及其制备方法，包括禽网状内皮增生病毒(REV)亚单位疫苗抗原和对应的免疫佐剂，获得上述抗原后与佐剂联合免疫接种，其中亚单位疫苗的制备是根据REV囊膜蛋白gp90基因设计的引物扩增后得到目的基因，经大肠杆菌等表达制备重组蛋白获得疫苗抗原，该重组抗原与硫代化核酸缓释佐剂乳化混匀后，对禽鸟进行免疫接种，能够有效地预防或治疗禽鸟REV的感染，具有很好的商品化开发前景。

主权项

一种禽网状内皮增生症病毒亚单位疫苗注射复合物，其特征在于，包括禽网状内皮增生病毒亚单位疫苗抗原和核酸缓释佐剂，其中所述的禽网状内皮增生病毒亚单位疫苗抗原为gp90蛋白抗原，其制备方法是通过设计的特异性引物：上游引物：5‑CCGGAATTCTCCTCCATACCTACCTATTACA‑3'其核苷酸序列如Seq ID No:1所示；下游引物：5‑AGAGTCGACTCAATTAGGGAGTGCCGTGT‑3其核苷酸序列如Seq ID No:2所示；扩增REV囊膜蛋白gp90的基因，构建包含gp90基因的原核表达质粒重组质粒REV‑gp90‑pET32a，经诱导表达纯化后获得；所述的核酸缓释佐剂其包括如下组分：全硫代修饰的5‘‑TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT‑3’核酸分子，其核苷酸序列如Seq ID No:3所示；7号白油；硬脂酸铝和司本80，其制备方法如下：7号白油和司本80分别按94％和6％体积比混合，之后将硬脂酸铝按2％质量比加入到上述混合物中，116℃高压灭菌，冷却至50℃，用力振摇至透明状；之后再按100μg/mL添加的上述全部硫代化修饰的CpG‑ODN，混匀，制备成油乳状。