[发明专利]一种脐血NK细胞的体外扩增方法及其试剂盒与应用

摘要

本发明公开了一种脐血NK细胞的体外扩增方法及其试剂盒与应用。本发明所提供的脐血NK细胞的体外扩增方法包括从分离的脐血单个核细胞活化培养和增殖培养脐血NK细胞的过程。与现有的分离及扩增脐血NK细胞的方法相比，本发明不需要细胞分选，不需要滋养层细胞，操作简单，通用性好，成本低，所用试剂不含动物源成分，安全性好，NK细胞产量高，获得的脐血NK细胞的纯度达90％以上，细胞总数可达1010‑11个/份脐血，对肿瘤细胞的杀伤力高。本发明将在制备肿瘤免疫治疗药物及肿瘤免疫治疗中发挥作用。

主权项

一种脐血NK细胞的体外扩增方法，包括以下步骤：1)活化培养脐血NK细胞：用淋巴细胞培养基调整脐血单个核细胞密度为0.5～5×106个/mL，再至少添加1～10μg/mL唑来膦酸和200～2000IU/mL重组人白介素‑2，在36℃～40℃、5％CO2饱和湿度环境中培养1～5天，收集细胞液；2)增殖培养脐血NK细胞：从步骤1)的细胞液中获取细胞，用GMP S&XFMTM‑CD淋巴细胞培养基调整细胞密度为0.5～5×106个/mL，再添加200～2000IU/mL重组人白介素‑2，在36℃～38℃、5％CO2饱和湿度环境中培养，每隔2‑3天补充新鲜培养基并调整细胞密度为0.5～5×106个/mL，培养14～35天，收获得到脐血NK细胞。