[发明专利]一种利用黄绿木霉发酵制备烟用滇橄榄香料的方法

摘要

本发明公开了一种利用黄绿木霉发酵制备烟用滇橄榄香料的方法。所述菌株为黄绿木霉(Trichoderma aureoviride)HLMM‑04 CGMCC No.10839，具有产纤维素酶，进而促进纤维素分解成寡糖或单糖的能力。将菌株通过活化、发酵、过滤、透析制得纤维素酶粗酶液，用于发酵滇橄榄，再经提取、过滤、减压浓缩制成烟用香料。菌株的最适产酶条件为培养基初始pH 6.5，培养温度28℃，培养时间5d。加香结果表明，所制备的香料具有生津、减少喉部刺激、改善余味的作用。

主权项

1.一种制备滇橄榄烟用香料的方法，包括以下步骤：（1）将保藏编号为CGMCC No. 10839的黄绿木霉（Trichoderma aureoviride）HLMM‑04菌株活化两次后，接种于装有200 mL PDA液体培养基的三角瓶中，在初始pH 6.5，培养温度28℃，180 rpm下发酵培养5d；所述的PDA液体培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，补蒸馏水至1 L，pH5.5～8.5，115℃高压灭菌15 min；所述的保藏编号为CGMCC No. 10839的黄绿木霉（Trichoderma aureoviride）HLMM‑04菌株，具有产纤维素酶，进而促进纤维素分解成寡糖或单糖的能力；（2）发酵液过滤去除菌体，取上清液缓慢加入硫酸铵 至80%饱和度，4℃下静置过夜，离心收集沉淀物并溶于2 mL缓冲液中，再用缓冲液进行透析，得到粗酶液；所述的缓冲液为：0.02 mol/L Na2HPO4‑NaH2PO4 ，pH 7.3；（3）将滇橄榄破碎后加入两倍重量的水，混合均匀，调pH至6.0；加入黄绿木霉HLMM‑04粗酶液，发酵，粗酶液添加量为滇橄榄质量的5%～20%，发酵温度30℃，发酵时间2～5h；回流提取3h，过滤除渣，将上清液减压浓缩，即得所需烟用香料。