[发明专利]构建待测基因组的DNA测序文库的方法及其应用有效
| 申请号： | 201610245445.5 | 申请日： | 2016-04-19 |
| 公开（公告）号： | CN105754995B | 公开（公告）日： | 2019-03-29 |
| 发明（设计）人： | 颉伟;张冰洁 | 申请（专利权）人： | 清华大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C40B50/06;C40B60/14;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 北京清亦华知识产权代理事务所(普通合伙) 11201 | 代理人： | 李志东 |
| 地址： | 100084 北京*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提出了一种构建待测基因组的DNA测序文库的方法，该方法包括：(1)利用微球菌核酸酶对待测基因组进行第一消化处理，以便获得第一消化处理产物；(2)将所述第一消化处理产物进行免疫共沉淀处理，以便获得免疫共沉淀处理产物；(3)利用蛋白酶K对所述免疫共沉淀处理产物进行第二消化处理，以便获得第二消化处理产物；(4)利用虾碱性磷酸酶对所述第二；消化处理产物直接进行去磷酸化处理，以便获得去磷酸化处理产物；(5)将所述去磷酸化处理产物直接进行变性处理，以便获得含有单链DNA分子的变性处理产物；以及(6)基于所述含有单链DNA分子的变性处理产物，按照TELP法获得测序文库。 | ||
| 搜索关键词： | 构建 基因组 dna 序文 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
1.一种构建待测基因组的DNA测序文库的方法，其特征在于，包括：(1)利用微球菌核酸酶对待测基因组进行第一消化处理，以便获得第一消化处理产物；(2)将所述第一消化处理产物进行免疫共沉淀处理，以便获得免疫共沉淀处理产物，所述免疫共沉淀处理是通过将所述第一消化处理产物与组蛋白抗体进行孵育实现的；(3)利用蛋白酶K对所述免疫共沉淀处理产物进行第二消化处理，以便获得第二消化处理产物，所述第二消化处理是通过利用洗脱缓冲液和蛋白酶K对所述免疫共沉淀处理产物进行消化处理实现的，所述第二消化处理后进一步对所述蛋白酶K进行灭活处理；(4)利用虾碱性磷酸酶对所述第二消化处理产物直接进行去磷酸化处理，以便获得去磷酸化处理产物，所述去磷酸化处理是在37摄氏度的条件下进行1小时；(5)将所述去磷酸化处理产物直接进行热变性处理，以便获得含有单链DNA分子的变性处理产物；以及(6)基于所述含有单链DNA分子的变性处理产物，按照TELP法获得测序文库。
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