[发明专利]一种用于叉头转录因子O1基因突变检测的试剂及应用

摘要

本发明公开了一种用于叉头转录因子O1（FOXO1）基因突变检测的试剂、PCR检测方法及应用，属于基础生物研究及生物检测技术领域。检测试剂包括引物、肽核酸荧光探针及野生型互补的肽核酸序列，正向引物如序列表中SEQ ID NO.1、NO.3；反向引物如序列表中SEQ ID NO.2、NO.4；肽核酸荧光探针如序列表中SEQ ID NO.5、NO.6；野生型互补肽核酸序列如序列表中SEQ ID NO.7、NO.8。本发明从转录水平能快速发现Wnt信号通路中FOXO1基因突变情况，具有特异性强、灵敏度高等显著优点，为抗癌药物筛选，新靶向药物探讨、基础科学研究提供工具。

主权项

1.一种用于人FOXO1基因突变检测的试剂在制备检测子宫内膜癌的检测试剂中的应用，其特征在于，所述用于人FOXO1基因突变检测的试剂包括：如SEQ ID NO.1所示的检测R609C突变型FOXO1基因序列的正向引物；如SEQ ID NO.2所示的检测R609C突变型FOXO1基因序列的反向引物；如SEQ ID NO.3所示的检测D624N突变型FOXO1基因序列的正向引物；如SEQ ID NO.4所示的检测D624N突变型FOXO1基因序列的反向引物；如SEQ ID NO.5所示的检测R609C突变型FOXO1基因序列的突变型PNA荧光探针；如SEQ ID NO.6所示的检测D624N突变型FOXO1基因序列的突变型PNA荧光探针；如SEQ ID NO.7所示的用于阻断FOXO1基因609密码子野生型序列扩增的PNA序列；和如SEQ ID NO.8所示的用于阻断FOXO1基因624密码子野生型序列扩增的PNA序列；所述PNA荧光探针的5'端的荧光报告基团为：FAM、HEX、TET、JOE、VIC、ROX、Cy3或Cy5， 3'端的淬灭基团为：TAMRA、Eclipse、BHQ1、BHQ2、BHQ3或DABCYL；所述用于人FOXO1基因突变检测的试剂还包括PCR反应液、609密码子和624密码子突变型参考品、609密码子和624密码子野生型参考品；其中PCR反应液包括：DEPC水、具有5'→3'外切活性的DNA聚合酶、dNTPs、10×PCR Buffer、RNASIN、M‑MLV逆转录酶、oligo dT和含Mg离子的溶液；所述609密码子突变型参考品为含SEQ ID NO.9所示的序列的重组质粒DNA；所述609密码子野生型参考品为含SEQ ID NO.10所示的序列的重组质粒DNA；所述624密码子突变型参考品为含SEQ ID NO.11所示的序列的重组质粒DNA；所述624密码子野生型参考品为含SEQ ID NO.12所示的序列的重组质粒DNA。