[发明专利]一种改变脂肪酶催化活性的活性重塑方法

摘要

本发明公开了一种改变脂肪酶催化活性的活性重塑方法，属于酶工程技术领域。本发明通过脂肪酶体外重塑过程中添加不同的调节因子，获得具有高酯化活性的重构脂肪酶，以满足脂肪酶非水相催化的需要。将不具有酯化活性或者活性较低的各种微生物脂肪酶，包括大肠杆菌工程菌外源表达的脂肪酶以及商品脂肪酶，经8M尿素变性处理，在复性过程中添加从华根霉细胞提取的膜环境复合物WTS，可获得酯化活性显著提高的活性重塑脂肪酶，同时脂肪酶常见的水解活性也发生变化。酯化活性的恢复使脂肪酶更适合工业化应用。

主权项

1.一种改变脂肪酶催化活性的活性重塑方法，其特征在于，所述方法是对脂肪酶进行变性和复性处理，在变性或者复性的过程中添加膜环境复合物，所述膜环境复合物是来自华根霉菌体细胞的膜环境复合物；所述膜环境复合物的提取方法是：(1)利用华根霉菌体经丙酮洗涤制备丙酮粉；(2)将丙酮粉悬浮于磷酸缓冲液中，搅拌、离心、取沉淀、洗涤两次以上，然后将洗涤后的沉淀重新悬浮于含有0.05‑0.15％Triton X‑100的磷酸缓冲液中，搅拌、离心，将得到的沉淀悬浮于1‑2％Triton X‑100磷酸缓冲液中，振荡4‑12小时、离心，得到的上清液为膜环境复合物及膜结合蛋白；(3)在提取液中加入吸附剂Bio‑beads，振荡、离心，所得上清液即为膜环境复合物WTS；所述活性重塑是指脂肪酶催化酯化反应的活性重塑。