[发明专利]一种大螟对氯虫苯甲酰胺抗性的分子检测方法及其专用引物

摘要

本发明公开了一种大螟对氯虫苯甲酰胺抗性的分子检测方法及其专用引物。本发明提供了一种特异性引物组合物，由序列表中的序列1、序列2及序列3所示单链DNA分子组成。所述特异引物组合物可用于检测氯虫苯甲酰胺的作用位点鱼尼丁受体是否发生了基因G4924E突变，所述大螟鱼尼丁受体基因的G4924E突变是指位于鱼尼丁受体基因的开放阅读框5’末端第14771位核苷酸由G突变为A，从而检测大螟对氯虫苯甲酰胺的抗性。本发明提供的特异性引物组合物及其应用对于监测大螟田间种群对氯虫苯甲酰胺抗性发展动态、指导合理用药，延缓抗性发展，制定抗性治理方针及时调整防治策略具有重要意义。

主权项

特异性引物组合物作为制备检测大螟对氯虫苯甲酰胺抗性试剂上的用途，其中所述的专用引物由下列序列组成：引物1：5’‑TGTTGGATGTCGCTGAGGG‑3’；引物2：5’‑TGTTGGATGTCGCTGAGGA‑3’；引物3：5’‑GAAGAAGTTGAACGCGATCA‑3’。其中，引物1为敏感型专用上游引物，引物2为抗性专用上游引物，引物3为敏感型/抗性专用下游引物。引物1的3’末端第1位核苷酸(见双下划线)与突变前的核苷酸一致，引物2的3’末端第1位核苷酸(见双下划线)与突变后的核苷酸一致。此外，为了增加等位基因特异性PCR方法的特异性，引物1和引物2的3’末端第3位和第4位核苷酸引入了错配碱基G和A(见波浪下划线)。其中，引物1和引物3为敏感引物对，引物2和引物3为抗性引物对。