[发明专利]一种重组人胰岛素结晶的制备方法

摘要

本发明提供一种重组人胰岛素结晶的制备方法，属于蛋白质结晶技术领域，该制备方法中使用锌离子，并进行三次结晶后，所得胰岛素结晶粒径大、均一性好，该方法不加入常规方法中使用的酚类和有机溶剂，避免了产品中有害物质的残留，提高了胰岛素结晶的质量，且制备工艺稳定，有利于工业生产。

主权项

一种重组人胰岛素结晶的制备方法，其特征在于，所述方法由以下步骤组成：1)将含有重组人胰岛素的反向高效层析液，加入锌盐溶液，使每OD₂₈₀nm的重组人胰岛素中含有锌离子的浓度为10‑55mg/ml,加入低温纯化水，当胰岛素溶液浓度稀释到0.5‑6mg/ml时，搅拌；2)向步骤1)中胰岛素溶液加入3‑5M的氨水进行调沉，直到pH为5.5‑7.5之间时，停止搅拌，得到一次结晶液；将一次结晶液转移至一结结晶罐中静置沉降，沉降后，测定上清液OD₂₈₀nm小于等于0.2时，排除上清液,得到一结结晶；3)将一结结晶转移到二结调沉罐中，向二结调沉罐中加入1‑3M醋酸进行溶解，搅拌，待一结结晶完全溶解后停止添加醋酸和搅拌，然后向罐中补入常温纯化水，使其稀释浓度为3‑18mg/ml；4)继续搅拌，待溶液搅拌均匀后进行调沉，向罐中加入3‑5M氨水调节溶液pH值至5.5‑7.5，停止搅拌，观察晶体，待晶体形成后，得到二次结晶液；将二次结晶液转移至二结结晶罐中静置沉降，沉降后，测定上清液OD₂₈₀nm值小于等于0.2时，将上清液排掉；得到二结结晶；5)向二结结晶罐中加入常温纯化水,搅拌，加入1‑3M醋酸，待结晶完全溶解后停止添加醋酸和搅拌；6)向步骤5)的二结结晶罐中补加锌盐溶液，使其锌离子浓度为0.3‑1.6×10^—4mg/ml，搅拌均匀后，经无菌滤芯过滤后，转移至已经灭菌的三结调沉罐中；7)向三结调沉罐中加入常温注射用水，稀释浓度范围为3‑18mg/ml，搅拌；8)向步骤7)的三结调沉灌中加入3‑5M氨水溶液调节溶液pH值，当溶液pH值调至5.5‑7.5后，观察晶体，待晶体形成后，得到三次结晶液；将三次结晶液转移至三结结晶罐中，静置沉降，过滤，得到重组人胰岛素结晶。