[发明专利]一种生物工程脱细胞真皮基质的制备及用途

摘要

本发明公开了一种新型的生物工程脱细胞真皮基质及其制备方法。对猪的皮肤进行预处理后得到真皮层皮片，真皮基质脱细胞过程中全程使用混合保护液；采用高静压技术预分离真皮组织内的细胞；采用复合核酸酶方法消化残余细胞核；利用去垢剂脱除松散破碎细胞片；使用混合保护液进行漂洗。本发明运用适宜高效的物理手段，辅助少量的酶和去垢剂的方法充分脱去真皮中的细胞成分，在保护液的全程保护下，可以保证在细胞核脱净的基础上，最大限度地降低真皮基质的免疫原性，且同时保留真皮基质的正常三维胶原纤维结构及排列极性，使制得的脱细胞真皮基质具有良好的稳定性与生物相容性。

主权项

一种生物工程脱细胞真皮基质的制备方法，具体步骤如下：(1)对猪的皮肤进行预处理后得到真皮层皮片；(2)全程使用包含一种或多种真皮结构保护剂的混合保护液；(3)采用高静压技术预分离真皮组织内的细胞；(4)采用含DNA酶和去垢剂的保护液去除残余细胞核和松散破碎细胞片；(5)在真皮基质混合保护液进行漂洗去除多余的生物酶和细胞残留；(6)获得具有正常胶原纤维的三维结构及排列极性的带有生物特性的脱细胞真皮层皮片；所述混合保护液由RPMI‑1640培养基添加硫酸软骨素、透明质酸、甘油、新霉素组成，并需调节pH值与渗透压到适宜值；其中所述硫酸软骨素的浓度为30‑80g/L；所述透明质酸的浓度为10‑50g/L；所述甘油的浓度为100‑500g/L；所述新霉素的浓度为5‑10mg/L，调节pH值至6.8‑7.2之间，渗透压为350‑450mOsm；所述的高静压压力条件为400‑600MPa，高静压频率为5～10次，每次为2～5分钟。