[发明专利]一种利用LAMP技术检测植物组织中茄科青枯菌的方法有效
| 申请号： | 201610312802.5 | 申请日： | 2016-05-11 |
| 公开（公告）号： | CN105779631B | 公开（公告）日： | 2018-03-02 |
| 发明（设计）人： | 佘小漫;何自福;汤亚飞;蓝国兵 | 申请（专利权）人： | 广东省农业科学院植物保护研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12R1/01 |
| 代理公司： | 广州市华学知识产权代理有限公司44245 | 代理人： | 苏运贞,裘晖 |
| 地址： | 510640 *** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用LAMP技术检测植物组织中茄科青枯菌的方法。本发明选取茄科青枯菌的特异基因hrpB，设计适合环介导等温扩增的引物FIP、F3、BIP、B3和环引物LoopF，取待检病样的茎基部，用水冲洗干净，取含有维管束的病组织放入灭菌容器中，加入灭菌水，静置，得到待检病样品悬浮液；以待检病样品悬浮液为模板，前述引物进行LAMP反应，通过肉眼观察环介导等温扩增的反应产物，如反应产物为绿色的浑浊液体，即确认病样中含有茄科青枯菌；如反应产物为橙色透明液体，则表明病样不含有茄科青枯菌。本发明具有快速、简便、准确性高、灵敏度高的优点。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 利用 lamp 技术 检测 植物 组织 中茄科青枯菌 方法 | ||
【主权项】：
一种利用LAMP技术检测植物组织中茄科青枯菌的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)环介导等温扩增茄科青枯菌引物设计：选取茄科青枯菌的特异基因hrpB，设计适合环介导等温扩增的引物FIP、F3、BIP、B3和环引物LoopF；FIP：5’‑CGCGTAGTCGTCGGACTTTCC‑CCGTGCGTATCAGCTCGT‑3’；F3：5’‑TTTCGCCGCTGATTTCGA‑3’；BIP：5’‑AGTGCGATGAAGAAGCGGAAGA‑CAGCTGGTCATCCGAATGG‑3’；B3：5’‑CTGCCAGCCGGTATTGC‑3’；LoopF：5’‑TCGCTGGGAGGAGTGGT‑3’；(2)检测病样品的准备：取待检病样的茎基部和根部，用水冲洗干净，取含有维管束的病组织；(3)青枯菌悬浮液制备：用灭菌的镊子将步骤(2)中获取的病组织放入灭菌容器中，加入灭菌水，静置，得到待检病样品悬浮液；(4)环介导等温扩增法反应：以步骤(3)获得的待检病样品悬浮液为模板，用步骤(1)的引物进行LAMP反应；(5)鉴别结果：通过肉眼观察环介导等温扩增的反应产物，如反应产物为绿色的浑浊液体，即确认病样中含有茄科青枯菌；如反应产物为橙色透明液体，则表明病样不含有茄科青枯菌；步骤(4)中所述的LAMP反应的反应条件为62℃恒温1h，95℃恒温2min。
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