[发明专利]抗草甘膦基因筛选方法、EPSPS突变基因和缺陷型菌株及应用

摘要

本发明公开了一种抗草甘膦基因筛选方法、EPSPS突变基因和缺陷型菌株及应用，该筛选方法可对与草甘膦感受相关的基因，包括植物基因进行克隆，多方位加速诱变，高通量抗草甘膦性能筛选，从而快速进化出能高度抗草甘膦的基因。该筛选方法利用细菌生长繁殖快、易培养的特点，能够快速使植物和其他来源的基因进化成为具有草甘膦抗性的突变基因。

主权项

一种抗草甘膦基因筛选方法，其特征在于，其包括：采用基因敲除技术敲除源菌株的干扰基因，得到缺陷型菌株，所述源菌株来自大肠杆菌DH5α、TOP10以及BL21中的一种，所述干扰基因包括功能不同的EPSPS基因和C‑P Lyase基因，所述缺陷型菌株为EPSPS和C‑P Lyase缺陷型菌株；先将外源EPSPS基因导入所述缺陷型菌株中，再经诱变处理后，得到含有外源EPSPS突变基因的第一突变菌，所述外源EPSPS基因来自目的植物；或者先将所述外源EPSPS基因经突变处理，得到外源EPSPS突变基因，再将所述外源EPSPS突变基因导入所述缺陷型菌株，得到第二突变菌；将所述第一突变菌或所述第二突变菌置于含有草甘膦的筛选培养基上进行筛选培养，得到具有草甘膦抗性的单克隆抗性菌；对所述单克隆抗性菌进行测序验证，得到具有草甘膦抗性的EPSPS突变基因；其中，敲除大肠杆菌的C‑P Lyase基因的方法包括：将SEQ ID NO.16所示的核苷酸片段转入到大肠杆菌中，得到敲除C‑P Lyase基因的大肠杆菌。