[发明专利]一种高产蛋白酶霉菌菌株的快速筛选方法

摘要

本发明公开了一种高产蛋白酶霉菌菌株的快速筛选方法，包括以下步骤：将需要进行筛选的霉菌菌株分别接种到霉菌生孢子培养基斜面上，然后恒温培养；在无菌干燥平皿中先倒入下层对照培养基，再倒入上层筛选培养基，再往制备好的双层平板中插入多个无菌小杯，制备得到高蛋白酶霉菌定向筛选平板；用已经培养好的待测霉菌孢子制成孢子悬液，并在孢子活化液体培养基中振荡活化培养；再分别注入前述的各无菌小杯中，恒温培养；培养完成后，直接量取高蛋白酶霉菌定向筛选平板上各透明圈直径；根据直径大小确定各霉菌菌株蛋白酶活力的大小，透明圈越大，霉菌菌株蛋白酶活力越大。本发明的方法具有方便操作、准确率高、工作量小及成本低等优点。

主权项

1.一种高产蛋白酶霉菌菌株的快速筛选方法，包括以下步骤：(1)菌种活化：将需要进行筛选的多种或多株霉菌菌株分别接种于霉菌生孢子培养基斜面，然后恒温培养；(2)制备高蛋白酶霉菌定向筛选平板：在灭菌干燥后的平皿中先倒入下层对照培养基，待其冷却凝固后再倒入上层筛选培养基；所述的下层对照培养基为纯琼脂培养基；所述的上层筛选培养基为改良酪素培养基；所述改良酪素培养基中添加去氧胆酸钠作为霉菌菌丝蔓延抑制剂；(3)放置并固定筛选装置：在上层筛选培养基待凝过程中放置多个同等大小的无菌小杯，培养基凝固后无菌小杯固定；(4)待测霉菌孢子悬液制备及活化：无菌生理盐水洗下步骤(1)中培养好的霉菌孢子，无菌擦镜纸过滤除菌丝后接入孢子活化液体培养基活化，再调整孢子浓度；(5)待测霉菌测定前培养：等量吸取步骤(4)制备的各霉菌活化孢子悬液，分别注入上述步骤(2)制得的高蛋白酶霉菌定向筛选平板的各无菌小杯中，接种完成后置于恒温培养箱中培养；(6)待测霉菌蛋白酶酶活对比筛选：上述步骤(5)的培养完成后，量取高蛋白酶霉菌定向筛选平板上各无菌小杯周围形成的透明圈直径；根据透明圈直径大小确定各霉菌菌株蛋白酶活力大小，透明圈越大，无菌小杯中接种的霉菌菌株蛋白酶活力越大。