[发明专利]一种蛋白质O-GlcNAc糖基转移酶活性电化学传感检测方法有效
| 申请号： | 201610390521.1 | 申请日： | 2016-06-03 |
| 公开（公告）号： | CN107462618B | 公开（公告）日： | 2019-05-21 |
| 发明（设计）人： | 杨郁;郭良宏;任肖敏;万斌;谷玉新 | 申请（专利权）人： | 中国科学院生态环境研究中心 |
| 主分类号： | G01N27/327 | 分类号： | G01N27/327;G01N27/48 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅;王春霞 |
| 地址： | 100085*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种蛋白质O‑GlcNAc糖基转移酶活性的电化学传感检测方法。它包括如下步骤：在电极表面构筑OGT的底物多肽分子的膜；将得到的表面固定有多肽分子的膜的电极与糖基化反应液采用OGT催化进行共孵育，得到表面固定有糖基化多肽分子的膜的电极；将表面固定有多肽分子的膜的电极和表面固定有糖基化多肽分子的膜的电极分别依次进行1)‑3)的处理，1)置于蛋白酶反应液中水解；2)用水清洗电极；3)以酪氨酸残基作为电化学信号探针，将电极进行电化学氧化反应；得到的体系分别测定各自体系中酪氨酸残基电催化氧化电流，根据得到的催化氧化电流，即可定量分析OGT的活性。本发明简单、快速、免标记的电化学生物传感器检测OGT活性的方法。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 蛋白质 glcnac 糖基转移酶 活性 电化学 传感 检测 方法 | ||
【主权项】：
1.一种蛋白质O‑GlcNAc糖基转移酶活性的电化学传感检测方法，包括如下步骤：(1)采用共价固定技术，在电极表面构筑蛋白质O‑GlcNAc糖基转移酶的底物多肽分子的膜，得到表面固定有多肽分子的膜的电极；所述多肽分子为含有酪氨酸残基且所述酪氨酸残基位于C端的多肽；(2)将所述表面固定有多肽分子的膜的电极与糖基化反应液采用蛋白质O‑GlcNAc糖基转移酶催化进行共孵育，使所述多肽分子发生糖基化反应，得到表面固定有糖基化多肽分子的膜的电极；(3)将所述表面固定有多肽分子的膜的电极和所述表面固定有糖基化多肽分子的膜的电极分别依次进行如下述1)‑3)的处理，得到的体系分别测定各自体系中酪氨酸残基电催化氧化电流，分别得到未糖基化的催化氧化电流和糖基化的催化氧化电流；1)置于蛋白酶反应液中水解；2)用水清洗电极；3)以酪氨酸残基作为电化学信号探针，将电极置于电子媒介体中进行电化学氧化反应；(4)根据所述未糖基化的催化氧化电流和所述糖基化的催化氧化电流，即可定量分析蛋白质O‑GlcNAc糖基转移酶的活性。
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