[发明专利]基于上转换发光技术的联合定量检测uNGAL和uCr的装置及其制备方法

摘要

一种基于上转换发光技术(UPT)的联合定量检测疾病标志物尿中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(uNGAL)和尿液稀释影响纠正因子尿肌酐(uCr)的免疫层析装置及其制备方法，属于免疫检测技术领域。由样品稀释液冻干粉、NGAL和Cr标准品冻干粉、免疫层析试纸条组成；免疫层析试纸条由衬板、样品垫或UCP结合垫、分析膜及吸收垫组成；分析膜上设有平行的两个检测线T1、T2和一个质控线C，两个检测线T1、T2分别包被抗NGAL抗体和抗Cr抗体，质控线包被抗UCP标记抗体来源动物免疫球蛋白的抗体，所述试纸条可使用UCP读数仪定量uNGAL和uCr。本发明可联合定量不同分子形式uNGAL和uCr，具有快速、简便等优点。uNGAL经uCr纠正后可提高NGAL早期诊断肾损伤等疾病的能力，因此具有极大的科研和临床应用价值。

主权项

一种基于上转换发光技术的联合定量检测uNGAL和uCr装置，其特征在于：由样品稀释液冻干粉、NGAL和Cr标准品冻干粉、免疫层析试纸条组成；(1)样品稀释液冻干粉是将20mL、pH＝7.2～7.5，含150～250mmol/L NaCl、0.25～0.5％(vol/vol)Tween‑20、0.5％～2％(wt/vol)BSA或2.5％～5％(wt/vol)脱脂奶粉的50～100mmol/L HEPES缓冲液经机械或磁力搅拌充分后，采用0.22μm或0.45μm滤器进行过滤除菌和除去不溶性杂质，经冻干后得到；(2)NGAL和Cr标准品冻干粉共4套，其中，标准品A：是用于单体uNGAL和uCr测定的标准品，每管含60ng单体NGAL和6μmol Cr；标准品B：用于同二聚体uNGAL和uCr测定的标准品，每管含60ng同二聚体NGAL和6μmol Cr；标准品C：用于异二聚uNGAL和uCr测定的标准品，每管含60ng异二聚体NGAL和6μmolCr；标准品D：用于三种分子形式uNGAL和uCr测定的标准品，每管含60ng NGAL和6μmol Cr，其中单体NGAL、同二聚体NGAL及异二聚体NGAL各占40％、40％和20％；(3)所述免疫层析试纸条分A和B两类，A类免疫层析试纸条由衬板、样品垫、分析膜及吸收垫组成；B类免疫层析试纸条由衬板、UCP结合垫、分析膜及吸收垫组成；UCP结合垫中含有UCP标记抗NGAL抗体和UCP标记Cr；(4)分析膜上设有平行的两个检测线T1、T2和一个质控线C，两个检测线T1、T2分别包被抗NGAL抗体和抗Cr抗体，且两者可以相互对调；质控线包被抗UCP标记抗体来源动物免疫球蛋白的抗体；所述衬板用于支撑样品垫或UCP结合垫、分析膜和吸收垫的组装，所述UCP结合垫用于结合UCP标记抗NGAL体和UCP标记Cr，所述分析膜用于检测线和质控线的设置从而实现NGAL和Cr的定量及免疫层析试纸条的质控，所述吸收垫用于收集分析后的样品溶液。