[发明专利]骨肉瘤循环肿瘤细胞鉴定试剂盒

摘要

本发明公开了一种骨肉瘤循环肿瘤细胞鉴定试剂盒，其包括针对每种标志基因mRNA的捕获探针和信号放大系统，所述标志基因包括有如下两类选自EpCAM、CDH1、KRT8、KRT16、KRT17、KRT18、KRT19、KRT20中的至少两种的上皮细胞标志基因，选自MMP2、MMP9、VIM、CDH2、FN1、HIF‑1a、SERPINE1、SURVIVIN、TWIST1、AKT2、SNAIL中的至少两种的骨肉瘤转移相关间质细胞标志基因。本发明骨肉瘤循环肿瘤细胞鉴定试剂盒，能够全面地检测出骨肉瘤循环肿瘤细胞，并评估其转移能力，同时避免了CTCs在不同癌症类型之间由于某些标志基因表达水平的差异而造成假阴性结果，进一步提高检测的准确性。

主权项

一种骨肉瘤循环肿瘤细胞鉴定试剂盒，其特征在于，包括针对每种标志基因的mRNA的捕获探针和信号放大系统，所述标志基因包括有如下两类：选自EpCAM、CDH1、KRT8、KRT16、KRT17、KRT18、KRT19、KRT20中的至少两种的上皮细胞标志基因，选自MMP2、MMP9、VIM、CDH2、FN1、HIF‑1a、SERPINE1、SURVIVIN、TWIST1、AKT2、SNAIL中的至少两种的骨肉瘤转移相关间质细胞标志基因；所述信号放大系统包括有末端修饰有荧光基团的扩增探针，或包括有扩增探针和末端修饰有荧光基团的标记探针，不同种类目标基因的荧光基团互不相同；其中，所述捕获探针用于连接标志基因mRNA与扩增探针，每条捕获探针从5’端到3’端的碱基组成依次为：可与待检测的标志基因mRNA结合的特异性序列P1、间隔臂序列、P2序列，所述P2序列为不存在发夹结构，探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配，与P1、P4和标志基因mRNA之间均不存在特异性结合的序列，针对同一类别的标志基因mRNA的捕获探针的P2序列相同；每条扩增探针从5’端到3’端的碱基组成依次为：能与相应捕获探针的P2序列互补配对的P3序列、间隔臂序列、P4序列；所述P4序列为不存在发夹结构，探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配、与P1、P2、P3和总mRNA之间均不存在特异性结合的序列；每条标记探针具有与相应扩增探针P4序列互补配对的P5序列。