[发明专利]一种通过固体发酵镰孢菌Fusariumsp.产生新抗菌剂sambacide的方法

摘要

本发明公开一种通过固态发酵镰孢菌Fusarium sp.B10.1(CGMCC No.11819)产生新抗菌剂sambacide的方法。即土豆培养基经Fusarium sp.B10.1(CGMCC No.11819)发酵，经过合适的溶剂超声提取，过滤，浓缩后，经硅胶和凝胶柱层析分离得到一个新的化合物sambacide。结合TLC薄层层析法以及高效液相色谱法，可检测到大量的sambacide的产生。Sambacide对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有显著的抗菌作用，是一个新的抗菌剂。该方法提供了一个新的抗菌化合物的生产方法。该方法是一种高效的，具有创新性的，反应条件温和的，绿色无污染的，易扩大化生产的，操作设备简单的大量产生抗菌化合物sambacide的方法，不仅满足了现代环境保护和低碳经济的需求，而且为后期工业化量产的进一步研究和开发奠定了坚实的基础。

主权项

一种通过固态发酵镰孢菌Fusarium sp. B10.1发酵产生新抗菌剂sambacide的方法，其特征在于按如下步骤进行固体发酵：（1）将拟用微生物镰孢菌Fusarium sp. B10.1首先进行活化，即将Fusarium sp. B10.1接种到经过121 °C高温灭菌处理的PDA斜面培养基后，于恒温培养箱中培养3‑7 d后，置于4 °C冰箱中；（2）将活化的菌种接到PDB种子培养基中，于恒温摇床中培养3‑7 d；（3）取洗净的土豆切成丁后，取适量的土豆丁置于组织培养瓶中；将装有土豆的组织培养瓶加盖包装后置于121 °C高温灭菌箱中灭菌30 min， 取出后将组织培养瓶冷却；（4）将步骤（2）的种子培养基在无菌环境下接种到经过步骤（3）前处理的土豆上，加盖后置于培养箱中培养5‑40 d后取出；（5）经微生物镰孢菌Fusarium sp. B10.1发酵后的土豆培养基经过甲醇超声提取、过滤和浓缩得到粗提物；分离粗提物得到的sambacide的结构式如下：；（6）经TLC薄层层析法检测，然后经过硅胶柱进行分离，分离过程采用梯度洗脱，洗脱剂为氯仿和甲醇混合物，其中氯仿：甲醇按20:1—5:1混合，然后经分离得到的化合物上凝胶柱纯化，通过1D/2D NMR以及HRESIMS鉴定得到新化合物结构；（7）采用如下HPLC色谱条件测定sambacide的产量。