[发明专利]一种生鲜乳是否合格的快速检测方法

摘要

本发明属于生鲜乳中主要病原菌快速检测方法技术领域，具体公开了一种生鲜乳是否合格的快速检测方法。本发明采用一种新型安全的色原试剂——TMB，与生鲜乳中污染细菌所产生的过氧化氢酶反应，生成可溶性淡蓝色的末端产物，该反应可以用2M H2SO4终止(产生黄色沉淀)，通过在450nm处读取反应OD值，间接反应出生鲜乳中细菌所产生的过氧化氢酶浓度，最终达到测定生鲜乳中细菌污染的程度的目的。该方法能在15min内准确、快速、简便地检测生鲜乳中细菌的含量，可多个样品同时测定，有效解决长期困扰生鲜乳中主要病原菌检测的技术难题。

主权项

一种生鲜乳是否合格的快速检测方法，其特征在于：所述生鲜乳是否合格的快速检测方法包括以下步骤：1）取生鲜乳样品于离心管中，在6000r/min的条件下离心20min，去除大颗粒及脂肪球后得到待测乳液；2）将20µL的待测乳液置于酶标反应试管中，加入TMB工作液100µL，置于37℃避光孵育15min，然后加入2 M H2SO4 溶液50µL，获取450nm处的OD450值；所述TMB工作液包括底物缓冲液以及TMB使用液；所述底物缓冲液与TMB使用液的体积比是1：1；所述TMB使用液中各组分用量分别为：2mg/mL的TMB无水乙醇溶液0.5mL、底物缓冲液10ml以及30% H2O2 32μL；所述底物缓冲液中各组分用量分别为：0.2 mol/L的Na2HPO4溶液25.7mL、0.1 mol/L的柠檬酸溶液24.3mL以及蒸馏水50mL，所述底物缓冲液的pH=6.6；3）判断步骤2）所检测得到的OD450值与0.741的关系；若OD450≦0.741时，则，该生鲜乳样品中的主要病原菌未超标，该生鲜乳样品为合格产品；若OD450﹥0.741时，则该生鲜乳样品中的主要病原菌超标，该生鲜乳样品为不合格产品；所述主要病原菌是能够产生过氧化氢酶的细菌。