[发明专利]蛋白质脱酰胺化的检测方法及其应用在审
| 申请号： | 201610444159.1 | 申请日： | 2016-06-20 |
| 公开（公告）号： | CN107522768A | 公开（公告）日： | 2017-12-29 |
| 发明（设计）人： | 周昌茂;王学海;许勇;董思聪;马铮;黄璐;肖强;刘哲 | 申请（专利权）人： | 湖北生物医药产业技术研究院有限公司;武汉珂美立德生物医药有限公司 |
| 主分类号： | C07K1/00 | 分类号： | C07K1/00;G01N30/89;C12Q1/48 |
| 代理公司： | 北京清亦华知识产权代理事务所(普通合伙)11201 | 代理人： | 李志东 |
| 地址： | 430075 湖北省武汉市东湖高新技*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明提出了蛋白质前处理方法、蛋白质脱酰胺化的检测方法及其应用。本发明所提出的蛋白质前处理方法能够充分消除蛋白二级结构的影响，充分暴露蛋白质中氨基酸的结构，进而便于后续对变性酶解后蛋白样品的检测，并且本发明所提出的方法不会引起蛋白质原氨基酸的结构变化，进而能够有效避免对后续检测的干扰。本发明所提出的蛋白质脱酰胺化的检测方法，能够特异、灵敏、快速、准确地检测蛋白质的脱酰胺化程度，可作为蛋白质生物药生产的重要的质控检测手段。 | ||
| 搜索关键词： | 蛋白质 脱酰胺化 检测 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
一种蛋白质前处理方法，其特征在于，包括：(1)将所述蛋白质进行第一稀释处理，所述第一稀释处理是在蒸馏水中进行的，第一稀释处理后的蛋白质的浓度为1mg/ml～4mg/ml；(2)将所述第一稀释处理后的蛋白质进行氮吹干处理，任选地，所述氮吹干处理是在氮气的流量为10～15L/min的条件下进行的；(3)将氮吹干处理后的蛋白质进行变性处理，所述变性处理是将所述氮吹干处理后的蛋白质与尿素进行接触实现的；(4)将变性处理后的蛋白质进行二硫键破坏处理，所述二硫键破坏处理是通过将所述变性处理后的蛋白质与DTT进行接触实现的；以及(5)将经过二硫键破坏处理后的蛋白质进行消化处理，以便获得变性酶解后的蛋白质，其中，所述消化处理是通过将所述经过二硫键破坏处理后的蛋白质与胰酶在37℃的条件下进行1～2h的接触实现的，所述胰酶与所述经过二硫键破坏处理后的蛋白质的质量比为1:20～1:100。
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