[发明专利]荧光探针的制备方法及基于荧光探针的土霉素检测方法

摘要

本发明公开了一种荧光探针的制备方法及基于荧光探针的土霉素检测方法，通过对氟硼荧光染料母环进行结构修饰，合成了一种水溶性较强的荧光探针，基于土霉素对该探针具有很好的，高灵敏度的荧光猝灭作用，根据加入土霉素标准溶液前后荧光探针的荧光强度的变化值和酸土霉素的浓度建立线性公式，再在相同条件下检测加入含土霉素样品前后探针的荧光强度，即可根据荧光强度的变化推算出样品中土霉素的含量。本发明避免使用相关的毒性试剂，无需使用昂贵仪器，同时缩短了检测时间，提高了检测灵敏度和特异性，具有很好的应用前景。

主权项

一种基于荧光探针的土霉素检测方法，其特征在于：所述荧光探针由以下方法制备而成：（1）称取吡咯和戊二酸酐溶于适量二氯甲烷中，得到混合物，然后迅速将混合物加入到三口烧瓶中，在N2保护下，向三口烧瓶中逐滴加入三氟化硼乙醚络合物，于常温下充分搅拌，反应8‑9小时；所述吡咯、戊二酸酐、三氟化硼乙醚络合物的摩尔比为2：1：6‑8；（2）在冰浴的环境下，向三口烧瓶中缓缓加入三乙胺，搅拌3.5‑4小时后停止反应；所加入的三乙胺与三氟化硼乙醚络合物的摩尔比为1：1‑1.25；（3）将上述步骤得到的反应液用石油醚和二氯甲烷的混合溶液萃取3次，收集黄绿色溶液，所述石油醚和二氯甲烷的体积比为2‑2.5:1；（4）将萃取得到黄绿色溶液旋转蒸发浓缩，收集固体，所述固体用硅胶柱层析分离，收集亮绿色溶液并旋转蒸发浓缩，收集固体并干燥后，得到荧光探针；基于所述荧光探针的土霉素检测方法包括以下步骤：1）绘制标准工作曲线：制备系列不同浓度的土霉素标准溶液，取若干支试管，分为空白荧光对照组和实验组，所有试管中加入磷酸盐缓冲溶液和荧光探针，然后向实验组的试管中加入不同浓度的土霉素标准溶液，空白荧光对照组不加土霉素标准溶液，测定所有试管中溶液的荧光强度；空白荧光对照组的荧光强度为F0，实验组的荧光强度为F，计算减弱的荧光强度△FI= F0‑ F，以不同的土霉素的浓度C0与对应减弱的荧光强度△FI作图，绘制标准工作曲线；2）测定样品中土霉素浓度：按照步骤1）的方法，向试管中加入磷酸盐缓冲溶液和荧光探针，然后向试管中加入待检测样品，测定试管中加入样品前后溶液的荧光强度并计算变化值，将检测结果与标准工作曲线对比，推算出待检测样品中土霉素含量。