[发明专利]一种抗体标记的碳纳米颗粒的制备方法及使用其制备的早孕试纸条

摘要

本发明提供了一种抗体标记的碳纳米颗粒方法及使用其制备的早孕试纸条，本发明以人绒毛膜促性腺激素(Human chorionic gonadotropin，简称HCG)为目标物，以化学共价法制备了相应的碳纳米颗粒标记的抗体，建立了碳纳米颗粒标记的免疫层析方法，应用于早孕检测中。本发明制备的碳纳米颗粒抗体及试纸条，检测线条显色为明亮的黄色，测试结果更为清晰且稳定性较高，可在室温下保存较长时间。

主权项

一种抗体标记的碳纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：(1)将碳纳米颗粒加到浓硫酸：浓硝酸：蒸馏水的比例为3:1:6的混合液中形成分散液，在室温下缓慢搅拌作用2h。(2)反应结束后，分散液在13000rpm下离心5min，移除上清液，用去离子水多次清洗，直到分散液的pH值达到7.0，最终重悬至10mg/mL。(3)取步骤(2)中的碳纳米颗粒分散液置于离心管中，超声处理1.5min，随后加入缓冲溶液低速震荡10s。(4)向步骤(3)中的碳纳米颗粒缓冲溶液中迅速滴入活化剂，快速置于涡旋振荡器上低速震荡1min后，固定在涡旋振荡器上，室温下震荡活化30min。(5)活化结束后，将步骤(4)中的碳纳米颗粒分散液在26℃，14000rpm下，离心12min后移去上清液，用缓冲溶液清洗，再次以相同条件离心后，弃去上清液，用缓冲溶液复溶重悬。(6)取β‑HCG单克隆抗体，加入缓冲溶液稀释至0.06mg/mL。(7)将步骤(5)中的复溶纳米颗粒分散液加入到步骤(6)中的抗体稀释液中，立刻在涡旋震荡器上震荡1.5min，随后超声1.5min，然后固定在涡旋振荡器上在室温下震荡反应1h。(8)反应结束后，将步骤(7)中溶液超声1min，在26℃，14000rpm下，离心12min后移去上清液，加入封闭液，同样然后固定在涡旋振荡器上在室温下震荡反应1h。(9)将步骤(8)中溶液离心后再次加入封闭液清洗，在26℃，14000rpm下，离心12min后移去上清液，可得到碳纳米颗粒标记的抗体。