[发明专利]一种基于复合PCR技术的大蒜中致病菌定性检测的方法

摘要

本发明公开了一种基于复合PCR技术的大蒜中致病菌的检测方法。该方法以大蒜中常用的致病、致腐菌灰葡萄孢霉菌B.cinerea Pers、葱鳞葡萄孢霉菌B.squamosa Walker、链格孢菌Alternaria alternata、胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides(penz.)sacc.为检测对象，以致病菌致病基因、特异性基因序列为靶标，设计复合PCR引物。经PCR扩增后，可在1次扩增反应中同时检测到四种致病菌。经实验室平板法验证，本方法稳定性良好，能够在3h之内对大蒜中致病菌进行检测，具有快速、省时、操作方便等优势。

主权项

用于鉴定大蒜中常见致病菌的1套复合PCR引物引物，其特征在于，包括4对引物，分别为：用于检测灰葡萄孢霉菌B.cinerea Pers的1对引物：上游引物序列B.c‑F:5’‑ATTTGGCTTCGCTGCTGT‑3’，下游引物序列B.c‑R:5’‑GCGGTGGTATCTCGCTCT‑3’，PCR产物大小162bp；用于检测葱鳞葡萄孢霉菌B.squamosa Walker的1对引物，上游引物序列B.s‑F：5’‑ATACTCCGCCATTAGCCC‑3’，下游引物序列B.s‑R：5’‑GCCGCCAACGATCTCAAA‑3’，PCR产物大小244bp；用于检测链格孢菌Alternaria alternata的1对引物，上游引物序列A.a‑F:5’‑TGACCCGCACATACAACT‑3’，下游引物序列A.a‑R:5’‑CAACCACCTTTCCAGAGCPCR‑3’，产物大小380bp；用于检测胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides(penz.)sacc.的1对引物，上游引物序列C.g‑F：5’‑CGGCTAGAACAGGACATT‑3’，下游引物序列C.g‑R：5’‑CAGAAGTTGGGGATTGAC‑3’，PCR产物大小455bp。