[发明专利]一套高效分泌表达异源蛋白的工程菌及其应用有效
| 申请号： | 201610649512.X | 申请日： | 2016-08-10 |
| 公开（公告）号： | CN106282079B | 公开（公告）日： | 2019-12-31 |
| 发明（设计）人： | 周志刚;潘兴亮;杨雅麟;李志敏;李娟 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院饲料研究所 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C07K14/195;C12N9/18;C12N15/75;C12R1/125 |
| 代理公司： | 11245 北京纪凯知识产权代理有限公司 | 代理人： | 关畅;白艳 |
| 地址： | 100081 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一套高效分泌表达异源蛋白的工程菌及其应用。本发明通过将胞内质量控制体系的相关基因YmfH、YrrN、YrrO和YwpE的敲除载体分别导入枯草芽孢杆菌感受态细胞，分别获得了对应基因的缺失菌株，并在不同工程菌株中表达了CBP21和AIO6BS蛋白。通过实验证明：胞内的质量控制体系的相关基因的失活，不同程度的影响了CBP21和AIO6BS的蛋白表达。说明对胞内质量控制体系相关因子的改造，有利于提高外源蛋白的合成、稳定折叠、分泌。同时本发明的一套胞内蛋白酶敲除的工程菌株，为研究胞内蛋白酶对外源蛋白的分泌表达的影响提供有效的工具，同时也为提高外源蛋白的产量和质量提供了一套工具。 | ||
| 搜索关键词： | 质量控制体系 胞内蛋白酶 工程菌株 外源蛋白 相关基因 敲除 蛋白 高效分泌表达 枯草芽孢杆菌 感受态细胞 蛋白表达 分泌表达 缺失菌株 一套工具 异源蛋白 工程菌 折叠 失活 分泌 合成 基因 应用 改造 研究 | ||
【主权项】：
1.一种重组菌，其特征在于：/n通过敲除枯草芽孢杆菌中YrrN蛋白编码基因的部分片段抑制或沉默枯草芽孢杆菌中YrrN蛋白编码基因的表达；/n通过敲除枯草芽孢杆菌中YwpE蛋白编码基因的部分片段抑制或沉默枯草芽孢杆菌中YwpE蛋白编码基因的表达；/n所述敲除枯草芽孢杆菌中YrrN蛋白编码基因的部分片段为将枯草芽孢杆菌中YrrN蛋白编码基因替换为抗性基因zeocin；/n所述敲除枯草芽孢杆菌中YwpE蛋白编码基因的部分片段为将枯草芽孢杆菌中YwpE蛋白编码基因替换为抗性基因zeocin；/n将枯草芽孢杆菌中YrrN蛋白编码基因替换为抗性基因为将包括所述YrrN蛋白编码基因上游同源臂、抗性基因表达盒和所述YrrN蛋白编码基因下游同源臂的同源重组片段A导入枯草芽孢杆菌中；/n将枯草芽孢杆菌中YwpE蛋白编码基因替换为抗性基因为将包括所述YwpE蛋白编码基因上游同源臂、抗性基因表达盒和所述YwpE蛋白编码基因下游同源臂的同源重组片段B导入枯草芽孢杆菌中；/n所述同源重组片段A的核苷酸序列为序列2；/n所述同源重组片段B的核苷酸序列为序列4；/n所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌BS168；/n使通过上述方法得到的菌表达几丁质结合蛋白CBP21或淬灭酶AIO6BS；/n表达的方法为将几丁质结合蛋白CBP21的编码基因或淬灭酶AIO6BS的编码基因导入通过上述方法得到的菌，从而获得重组菌。/n
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