[发明专利]一种毛霉型豆豉苦味肽的制备方法及应用

摘要

本发明提供一种毛霉型豆豉苦味肽的制备方法及应用，制备粉末A、粉末B、粉末C；将粉末C溶于去离子水中，以A相质量分数0.05％三氟乙酸水溶液和B相质量分数0.05％三氟乙酸乙腈溶液为洗脱液，采用半制备型HPLC反相C18柱进行梯度洗脱，收集目标峰，冷冻干燥，得粉末D；将粉末D溶于去离子水中，以A相质量分数0.05％三氟乙酸水溶液和B相质量分数0.05％三氟乙酸乙腈溶液为洗脱液，采用分析型HPLC反相C18柱进行梯度洗脱，收集目标峰，冷冻干燥，得苦味肽I。制得的苦味肽I应用于食品中，提供食品豆豉苦味，增加食品的鲜味；该苦味肽易于化学合成，且合成的产品纯度高，稳定性好，可扩宽该苦味肽的应用领域。

主权项

1.一种毛霉型豆豉苦味肽的制备方法，其特征在于，该毛霉型豆豉苦味肽的制备方法包括以下步骤：(1)、粗肽的制备：称取10.00g‑20.00g的豆豉样品，液氮速冻，冻结状态研磨成粉；按料液比1:8‑16加去离子水；冰浴匀浆6min‑12min；60W‑120W下超声提取20min‑40min；调整pH为5.5‑6.5；45℃下搅拌50min‑90min；4℃下离心2000g，15min‑30min；取上清液，重复提取一次，合并两次提取液；4℃下离心10500g，15min‑30min；上清液经100 Da‑200Da的透析袋流水透析18h‑30h；收集提取液冷冻干燥得粗肽粉末A；(2)、将粉末A溶于去离子水中使粉末A溶液浓度达到5mg/mL‑40mg/mL；采用NKA‑II大孔树脂柱进行纯化；首先以去离子水洗脱至平衡；再以20‑30％乙醇溶液为洗脱液进行洗脱；收集洗脱组分，浓缩冻干，得粉末B；(3)、将粉末B溶于去离子水中使粉末B溶液浓度达到5mg/mL‑40mg/mL；再采用Sephadex G‑25凝胶柱进行纯化；以去离子水为洗脱液进行洗脱；收集目标峰，浓缩冻干，得粉末C；(4)、将粉末C溶于质量分数0.05％TFA三氟乙酸的水溶液中使粉末C溶液浓度达到5mg/mL～10mg/mL；以A相质量分数0.05％TFA水溶液，B相质量分数0.05％TFA乙腈溶液为洗脱液；采用半制备型HPLC反相C18柱进行纯化和梯度洗脱；收集目标峰，浓缩冻干得粉末D；(5)、将粉末D溶于质量分数0.05％TFA三氟乙酸的水溶液中使粉末D溶液浓度达到1mg/mL；以A相质量分数0.05％TFA水溶液，B相质量分数0.05％TFA乙腈溶液为洗脱液；采用分析型HPLC反相C18柱进行纯化和梯度洗脱；收集目标峰，浓缩冻干得粉末E，E为豆豉苦味肽；所述的步骤(4)中半制备型HPLC反相C18柱洗脱液的检测波长为214nm；所述的步骤(4)中梯度洗脱程序如下：0‑5min,0‑5％B；5min‑20min,5％‑20％B；20min‑40min,20％‑35％B；所述的步骤(5)中梯度洗脱程序如下：初次分离为：0‑4min,0‑0％B；4min‑29min,0‑100％B；29min‑35min,100％‑100％B；二次分离为：0‑4min,0‑0％B；4min‑14min,0％‑40％B；14min‑17min,40％‑40％B；所述的步骤(5)中分析型HPLC反相C18柱洗脱液的检测波长为280nm；所述的毛霉型豆豉苦味肽的制备方法得到的豆豉苦味肽的氨基酸序列为Ala‑Phe‑Asp‑Glu‑Lys。