[发明专利]小花清风藤中六种酰胺类生物碱的分离提取方法

摘要

本发明属于生物学领域，具体涉及一种小花清风藤中六种酰胺类生物碱的分离提取方法，具体包括了醇提水沉、溶剂萃取及制备薄层色谱分离的纯化方法。本发明解决了小花清风藤中6种酰胺类化合物结构差别较小，致分离纯化难度较大的问题，成功分离纯化了6种酰胺类化合物。其中化合物N‑cis‑N‑coumaroyl tyramine为从该植物中得到的新天然产物，其他5种均为该植物中首次分离得到的。

主权项

小花清风藤中六种酰胺类生物碱的分离提取方法，其特征在于，具体包括以下步骤：A：取小花清风藤干燥叶，粉碎，用其质量3.95倍的甲醇超声提取；B：将甲醇提取后得到的提取液浓缩至总提取体积的十分之一，向浓缩后的溶液中加入等体积量的纯化水，并搅拌均匀，在7℃条件下放置过夜；C：将放置过夜的溶液抽滤，弃去沉淀，滤液浓缩至不含醇；D：将步骤C得到的浓缩液加入其体积2倍量的纯化水稀释，用等体积的乙酸乙酯对稀释后的溶液进行萃取，将萃取液浓缩得到浸膏；E：将步骤D得到的浸膏加入其质量1.58倍的甲醇溶解，滤去不溶物后，向甲醇溶液中加入等体积的丙酮，并搅拌均匀，在7℃的条件下放置过夜；F：将步骤E得到的溶液进行抽滤，弃去沉淀，滤液浓缩至干，即得到6种酰胺的总生物碱样品；G：将总生物碱样品用其质量0.79倍的丙酮溶解，加入与总生物碱样品质量相同的柱色谱硅胶，搅拌均匀，并挥去丙酮溶剂，用硅胶柱色谱进行进一步分离纯化，取总生物碱样品质量20倍的柱色谱硅胶，湿法装柱，以二氯甲烷:甲醇的体积比为10:1的溶液为起始溶剂进行洗脱，共收集3部分样品，分别命名为E1、E2、E3，E1部分为样品的绿色色带全部出柱后即停止收集，E2部分为以二氯甲烷:甲醇的体积比为10:1的溶液为起始溶剂洗脱四个保留体积的溶剂浓缩后的产物，E3部分为纯甲醇洗脱部分，E1和E3部分均弃去；H：以二氯甲烷:甲醇的体积比为2.6:1的溶液为展开剂，将E2部分进行制备薄层分离，分别得到4个样品，分别为E2‑1、E2‑2、E2‑3、E2‑4，其中，E2‑1的Rf值为0.90、E2‑2的Rf值为0.56～0.60、E2‑3的Rf值为0.40～0.50、E2‑4的Rf值为0.20～0.26；I：将E2‑2、E2‑3、E2‑4进一步进行制备薄层,其中，E2‑2、E2‑3均以正己烷:丙酮的体积比为1.5:1的溶液为展开剂，且采取二次展开，E2‑2得到两个样品分别命名为E2‑2‑1和E2‑2‑2，E2‑2‑1和E2‑2‑2的Rf值分别为0.40和0.32；E2‑3得到两个样品分别命名为E2‑3‑1和E2‑3‑2，二者的Rf值分别为0.41和0.35；E2‑4以正己烷:乙酸乙酯的体积比为1:2的溶液为展开剂，得到两个样品，分别命名为E2‑4‑1和E2‑4‑2，二者的Rf值分别为0.27和0.21；E2‑2‑1、E2‑2‑2、E2‑3‑1、E2‑3‑2、E2‑4‑1、E2‑4‑2分别对应6个酰胺类化合物中的1、2、3、4、5、6；1‑6的结构式分别为