[发明专利]链霉菌重组质粒pIJ8600‑attM及其构建方法和其应用

摘要

本发明公开了一种链霉菌重组质粒pIJ8600‑attM及其构建方法和其应用，该重组质粒是基于大肠杆菌‑链霉菌穿梭质粒pIJ8600，采用限制性酶切以及DNA连接原理，插入了功能性的解酯酶基因attM片段构建而成。该质粒用于链霉菌群体感应分子γ‑丁内酯的降解,因此可应用于基于群感淬灭的动植物放线菌病原体的防治、同时用于空气、水体等环境中抑制某些放线菌所产次生代谢物或者生物膜。该质粒降解丁内酯的后续用途是基于链霉菌同源重组的基因表达，相较于其它物理、化学方法，成本低廉，无残留，环境友好。

主权项

一种重组质粒，其特征在于：所述质粒是基于大肠杆菌‑链霉菌穿梭质粒pIJ8600，采用限制性酶切以及DNA连接原理，插入了功能性的解酯酶基因attM片段构建而成；它包含来源于pUC18质粒的DNA复制起点(ori)、便于在大肠杆菌与链霉菌中筛选的阿泊拉霉素(Apra)抗性标记aac(3)IV、便于接合DNA转移到受体细胞的源于RK2质粒的转移起点(oriT)、多个限制性酶切位点组成的多克隆位点(MCS)、紧挨着多克隆位点(MCS)上游的由硫链丝菌素诱导驱动的强启动子tipAp以及位于多克隆位点(MCS)下游的转录终止子tfd以防止转录的通读；它还包含如上所述的解酯酶基因attM。