[发明专利]一种基于反相色谱飞行时间质谱的喉癌血清差异代谢物的测定筛选方法

摘要

一种基于反相色谱飞行时间质谱的喉癌血清差异代谢物的测定筛选方法，其特征在于：血清经过有机溶剂‑甲醇沉淀蛋白以后，然后离心、真空离心干燥，然后复溶于200 µL的纯水，引入反相色谱飞行时间质谱仪进行测定，经过峰对齐、校正和标准化、多变量统计分析和谱库检索可以找到喉癌志愿者和健康志愿者血清中的差异代谢物。本发明为全新的血清中差异代谢物的鉴定方法，通过差异代谢物可以反应喉癌患者血清代谢物的变化情况，将有助于喉癌的诊断、临床治疗、预后判断及其发病机制的研究。

主权项

1.一种基于反相色谱飞行时间质谱的喉癌血清差异代谢物的测定筛选方法，其特征在于：是以喉癌志愿者和健康志愿者血清为样本进行测定、比较、筛选，具体包括以下工艺步骤：a、血液在室温下解冻，移取400 µL的血清，加入1200 µL的甲醇，涡旋混合15 s，然后以15800 g离心力在离心机中离心15 min；b、移取370 µL的上清液于2 mL的离心管中，然后于真空离心机中离心干燥，然后复溶于200 µL的纯水中，然后装入色谱瓶中待测；c、反相色谱飞行时间质谱对所有血清样本进行逐一分析，得原始数据；反相色谱条件为：采用ACQUITY UPLC® BEH柱 ，规格2.1 × 150 mm, 1.7 µm进行分离，柱子温度为50 ºC，流动相A为0.1%的甲酸水，流动相B为0.1%的甲酸乙腈，流动相流速为385 μL/min，梯度洗脱，总分析时间为38 min，进样量为5 μL；梯度洗脱条件具体为：0-1min，5%B-5%B；1-10 min，5%B-20%B；10-12 min，20%B-60%B；12-33 min，60%B-100%B；33-35min，100%B-100%B；35-36 min，100%B-5%B，并维持2 min；飞行时间质谱检测器的条件：电喷雾离子源，多反应监测正离子扫描方式；喷雾电压为3500 V，干燥气为4 L/min ，雾化气为0.04 MPa，碰撞能量为7 eV，传输时间为100 µs；d、将原始数据转换为mzXML的格式后，对数据进行峰对齐、校正、滤噪后，采用SIMCA-P多元数据分析软件进行多变量统计分析，筛选VIP大于1的代谢物；e、用SPSS进行T检验，对于P<0.05且VIP大于1的为潜在差异代谢物；f、对于潜在差异代谢物，采用谱库检索或者标准品比对方法进行验证，即为差异代谢物。