[发明专利]一种黑果腺肋花楸开放式组织培养快速育苗方法

摘要

本发明提供一种黑果腺肋花楸开放式组织培养快速育苗方法，分化、继代、扩繁阶段的培养基创造性采用改良WPM培养基，且优化了各激素的类别和浓度比例；此外扩繁培养基中还加入了核黄素，因此，本发明方法获得的组培苗分化系数高，长的壮，生长质量高，培养周期短。在生根阶段采用添加抑菌剂的生根培养基，用开放式组培方法，不经过高温高压灭菌的情况下仍能保持60天以上不生菌，生根周期缩短至15‑18天，生根系数提升至100％。整套方法提高了黑果腺肋花楸组培苗质量和生根效率，较常规方法缩短培育全程周期25‑30天，还可以大幅降低生产成本。

主权项

一种黑果腺肋花楸开放式组织培养快速育苗方法，其特征是，将外植体消毒处理接种后，按如下步骤进行：(1)分化培养分化培养基为：改良WPM+0.02mg/L NAA+1mg/L 6‑BA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂粉；培养条件：温度25℃±3℃，湿度25％‑50％，光照强度3000lx‑6000lx，光照时间10h‑12h；培养时间为15‑20天；所述改良WPM配方为：硝酸钾190mg/L，硝酸铵400mg/L，磷酸二氢钾170mg/L，硫酸镁370mg/L，四水合硝酸钙684mg/L，硼酸6.2mg/L，四水合硫酸锰22.3mg/L，七水合硫酸锌8.6mg/L，二水合钼酸钠0.25mg/L，五水合硫酸铜0.25mg/L，C10H13FeN2NaO8 73.4mg/L，肌醇100mg/L,甘氨酸2mg/L,VB10.1mg/L,VB60.5mg/L,烟酸0.5mg/L；(2)继代培养培养基配方、培养条件及培养时间与步骤(1)分化培养相同；(3)扩繁培养扩繁培养基为：改良WPM+0.02mg/L NAA+1mg/L 6‑BA+300mg/L核黄素+30g/L蔗糖+6g/L琼脂粉；培养条件：温度25℃±3℃，湿度25％‑50％，光照强度3000lx‑6000lx，光照时间10h‑12h；培养时间为15‑20天；所述改良WPM配方与步骤(1)分化培养基中相同；(4)生根培养生根培养基为：1/2MS+0.5mg/L IBA+0.11mg/L GA+300mg/L核黄素+1ml/L抑菌剂Ⅰ+1.5ml/L抑菌剂Ⅱ+30g/L蔗糖+6g/L琼脂粉；所述抑菌剂Ⅰ：1.5％益培隆和2.5％氯霉素各取1ml配制成1升抑菌剂Ⅰ；所述抑菌剂Ⅱ：取对羟基苯甲酸乙酯20g，山梨酸钠15g，一水合柠檬酸三钾10g，配制成1升抑菌剂Ⅱ；培养条件：温度25℃±3℃，湿度25％‑50％，光照强度3000lx‑6000lx，光照时间10h‑12h，培养时间为15‑18天；所述步骤(3)扩繁培养后，将长势相对较弱的幼苗转到壮苗培养基中，进行壮苗培养；壮苗培养基为：改良WPM+0.2mg/L IAA+0.5mg/L GA+300mg/L核黄素+30g/L蔗糖+6g/L琼脂粉；培养条件：温度25℃±3℃，湿度25％‑50％，光照强度3000lx‑6000lx，光照时间10h‑12h,培养时间15‑20天；所述改良WPM配方与步骤(1)分化培养基中相同。