[发明专利]一种应用于丝状真菌中特异性沉默基因的干扰质粒pHX-RNAi有效
| 申请号： | 201610738067.4 | 申请日： | 2016-08-26 |
| 公开（公告）号： | CN106282223B | 公开（公告）日： | 2019-08-20 |
| 发明（设计）人： | 宋欣;薛海曌 | 申请（专利权）人： | 山东大学 |
| 主分类号： | C12N15/80 | 分类号： | C12N15/80;C12N15/65;C12R1/80 |
| 代理公司： | 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 | 代理人： | 李健康 |
| 地址： | 250061 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种应用于丝状真菌中特异性沉默基因的干扰质粒pHX‑RNAi，该质粒包括一个完整的潮霉素抗性基因表达盒，一个草酸青霉来源的启动子，一个草酸青霉来源的内含子结构；该干扰质粒的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明还公开了该质粒在丝状真菌草酸青霉菌中对一些很难敲除的基因进行单基因或多基因表达沉默的应用。本发明以草酸青霉中淀粉酶基因amy15A为例，证实了了干扰质粒pHX‑RNAi的高效稳定性，并以amy15A和cel7A‑2双基因干扰为例，验证了载体pHX‑RNAi用于多基因沉默的优势。SDS‑PAGE，酶活测定以及RT‑qPCR检测结果表明RNA干扰在转录后水平发挥了显著且稳定的作用，预示该干扰质粒在丝状真菌中具有良好的应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 干扰质粒 丝状真菌 草酸青霉 特异性沉默 应用 质粒 基因 潮霉素抗性基因 草酸 淀粉酶基因 多基因表达 核苷酸序列 转录 检测结果 酶活测定 表达盒 单基因 多基因 内含子 启动子 青霉菌 双基因 敲除 验证 | ||
【主权项】：
1.一种应用于丝状真菌中特异性沉默基因的干扰质粒pHX‑RNAi在草酸青霉菌中对淀粉酶基因amy15A进行单基因表达沉默或对淀粉酶基因amy15A和外切纤维素酶基因cel7A‑2进行多基因表达沉默的应用；其中：所述的干扰质粒pHX‑RNAi包括一个完整的潮霉素抗性基因表达盒，一个草酸青霉来源的启动子，一个草酸青霉来源的内含子结构；该干扰质粒的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
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