[发明专利]一种经济快速提取酒醅中微生物基因组DNA的方法

摘要

本发明涉及白酒酿造技术领域，具体涉及酒醅中微生物基因组DNA的提取。该方法包括以下步骤：(1).酒醅中微生物细胞破壁：称取酒醅样品和石英砂，加入裂解液，震荡离心，得到核酸粗提取液。(2).核酸纯化：加入苯酚：氯仿：异戊醇(P.C.I)，离心除去蛋白，加硅胶膜结合液，核酸纯化柱过滤，70％乙醇洗脱，加去离子水或TE溶液保存DNA。该方法操作简便、耗费成本低、劳动强度小、节约时间、提取的酒醅中微生物基因组质量高，可用于二代测序、荧光定量PCR等分子生物学分析。

主权项

1.一种经济快速提取酒醅中微生物基因组DNA的方法，包括以下步骤：/n1）酒醅中微生物细胞破壁：将研磨剂、酒醅样品和裂解液混和后高速震荡，然后离心；所述的研磨剂为石英砂；所述的石英砂粒径为12-20目；所述裂解液配方如下：1.5-2.5%CTAB (w/v)，90-112 mM pH 8.0的Tris-HCl，18-24mM pH8.0的EDTA，1.2-1.6 M NaCl；所述研磨剂、酒醅样品和裂解液三者的比例依次为15～22g:6～9g:16～24mL；/n2）核酸纯化：/na)除杂：取步骤1）中离心后的上清液加入P.C.I混匀，离心；所述的P.C.I为24-26体积苯酚：23-25体积氯仿：0.5-1.5体积异戊醇；所述P.C.I与上清液的体积比为0.8～1.2：1；/nb)过柱：将离心后的上清液与硅胶膜结合液混匀，然后过核酸纯化柱，离心弃滤液；所述的硅胶膜结合液为pH为4-6.5的盐酸胍与乙酸钾的混合液；所述上清液与硅胶膜结合液的体积比为1:1.5～2.5；所述盐酸胍与乙酸钾的摩尔质量比为：3-4M：0.5M；/nc)洗柱：加入70%乙醇过核酸纯化柱，然后高速离心甩干核酸纯化柱，自然条件下干燥；/nd)洗脱：在核酸纯化柱的硅胶膜上加洗脱液溶解DNA，离心洗脱下DNA溶液；所述洗脱液选自无菌水或TE溶液。/n