[发明专利]一种脱氮型活性污泥微生物胞内一氧化氮原位测定的方法有效
| 申请号： | 201610829280.6 | 申请日： | 2016-09-18 |
| 公开（公告）号： | CN106645046B | 公开（公告）日： | 2019-12-27 |
| 发明（设计）人： | 高春娣;李任飞;焦二龙;田烨;孙大阳;祝海兵 | 申请（专利权）人： | 北京工业大学 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64 |
| 代理公司： | 11203 北京思海天达知识产权代理有限公司 | 代理人： | 张立改 |
| 地址： | 100124 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 一种脱氮型活性污泥微生物胞内一氧化氮原位测定的方法，涉及污水生物处理领域。选取脱氮型污泥，用1*PBS清洗，稀释至原本泥量；脱氮型无膨胀污泥：样品涂在玻片well孔中，室温晾干。避光条件下，取DAF‑FM DA添加到涂有样品的well孔中，20‑37℃恒温静置5‑20分钟后取出，避光条件下1*PBS洗玻片，晾干，加入抗荧光衰减剂并指甲油密封，荧光原位检测；脱氮型膨胀活性污泥：避光条件下，将DAF‑FM DA与样品等量混合，0‑4℃下静置5‑20分钟。样品平铺在玻片well孔中，室温晾干，加入抗荧光衰减剂并密封，荧光原位检测。本发明，可用来确定NO变化情况及NO在不同微生物细胞中的分布情况。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 脱氮型 活性污泥 微生物 一氧化氮 原位 测定 方法 | ||
【主权项】：
1.一种脱氮型活性污泥微生物胞内一氧化氮原位测定的方法，其特征在于：包括以下步骤：/n（1）、选取未膨胀的脱氮型污泥或已膨胀的脱氮型污泥作为目标污泥，分析其特征情况；未膨胀的脱氮型污泥的SVI值小于150 mL/g，已膨胀的脱氮型污泥的SVI值大于150 mL/g；/n（2）、用1*PBS清洗目标污泥三次，并用1*PBS稀释至原本泥量，去除脱氮型污泥中其他杂质的干扰；/n（3）、未膨胀的脱氮型污泥微生物胞内一氧化氮原位测定的方案为：吸取步骤（2）1-10μL样品均匀地涂在事先用明胶包被好的玻片上的每个well孔中，涂片量同样以刚好平铺实际玻片上well孔为准，并在室温下晾干；在避光条件下，取1-20 μL浓度为1-50 μmol/L的DAF-FM DA 即NO荧光探针液添加到涂有样品的每个well孔中，DAF-FM DA添加量以探针液包被住well孔中污泥；将样品放置于20-37℃恒温条件下静置5-20分钟后取出，在避光条件下用1*PBS洗涤玻片三次，将未进入微生物细胞的DAF-FM DA即NO荧光探针液去除，并置于室温下晾干，加入抗荧光衰减剂，并用指甲油密封，进行后续荧光原位检测；/n或已膨胀的脱氮型污泥微生物胞内一氧化氮原位测定的方案为：在避光条件下，先将稀释好的1-50 μmol/L的DAF-FM DA 即NO荧光探针液与步骤（2）样品等体积混合，混匀后置于0-4℃条件下静置5-20分钟，后再吸取1-10μL加有DAF-FM DA的样品均匀平铺涂在事先用明胶包被好的玻片每个well孔中，涂片量以刚好平铺实际玻片上well孔为准，并置于室温下晾干，加入抗荧光衰减剂，并用指甲油密封，进行后续荧光原位检测。/n
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