[发明专利]一种基于金-石墨烯纳米组装体对Mucin-1手性信号超灵敏检测的方法

摘要

一种基于金‑石墨烯纳米组装体对Mucin‑1手性信号超灵敏检测的方法，属于材料化学技术领域。本发明包括金纳米粒子的合成，石墨烯纳米材料的准备，金纳米粒子与Mucin‑1适配体的偶联，石墨烯与Mucin‑1适配体部分互补序列的偶联，以及金‑石墨烯纳米结构的组装和之后的TEM和手性信号的表征和测定。基于不同Mucin‑1浓度对金‑石墨烯组装体的解离程度不一样从而影响其手性信号的强弱来建立Mucin‑1浓度与金‑石墨烯组装体手性信号的关系，来实现Mucin‑1的定量检测。本发明提供了能够通过圆二色信号超灵敏检测Mucin‑1含量的方法，制备出了圆二色性能高，生物稳定性好的金‑石墨烯自组装纳米结构。

主权项

1.一种基于金‑石墨烯纳米组装体对Mucin‑1手性信号超灵敏检测的方法，其特征在于：将偶联有Mucin‑1适配体的金纳米粒子和偶联有与Mucin‑1适配体部分互补序列的石墨烯组装得到金‑石墨烯纳米组装体；存在有待测物Mucin‑1时，组装体的结构发生改变，金纳米粒子从组装体上解离，进而引起组装体手性信号的改变，从而实现对Mucin‑1的超灵敏检测；具体步骤如下：（1）检测传感器的构建：a、金纳米粒子上修饰Mucin‑1适配体Mucin‑1 aptamer：采用柠檬酸还原法合成的金纳米粒子，将其离心浓缩后，重悬于超纯水中，浓度为5nM；取100μL浓缩重悬后的金纳米粒子，加入到含有2μL 10μM巯基化的Mucin‑1 aptamer和终浓度为50mM的NaCl溶液中，37℃孵育过夜，得到偶联了Mucin‑1 aptamer的金纳米粒子溶液，待用；b、石墨烯偶联Mucin‑1适配体部分互补序列Mucin‑1 CS：取破碎后的石墨烯用超纯水稀释使终浓度为0.1mg/mL；按EDC、NHS和石墨烯的摩尔比为1000︰1000︰1，加入EDC和NHS，在避光的情况下反应2h；之后，用截留量30k的超滤管过滤，用pH为7.5、10mM的PB缓冲液重悬；向其中加入终浓度2μM的Mucin‑1 CS，反应3h，得到石墨烯‑ Mucin‑1 CS溶液，待用；c、金‑石墨烯纳米结构的组装：取100μL步骤a制备的金纳米粒子偶联Mucin‑1 aptamer溶液7500rpm离心10min，除去上清；取100μL步骤b制得的石墨烯‑Mucin‑1 CS溶液用超滤管过滤；最后两种过滤物混合于100μL含有50mM NaCl、50mM Mg(NO3)2和质量浓度为0.01%的十二烷基硫酸钠SDS的10mM TBE 缓冲液中，杂交12h；梯度离心，用超纯水重悬，得到高产率的金‑石墨烯纳米组装体；（2）圆二色光谱检测：建立金‑石墨烯纳米组装体手性信号与Mucin‑1浓度的标准曲线，根据Mucin‑1浓度与金‑石墨烯纳米组装体手性信号强度的关系建立两者之间的标准曲线，从而应用手性信号对Mucin‑1浓度进行检测。