[发明专利]人源白细胞介素6的siRNA、重组表达CAR-T载体及其构建方法和应用

摘要

本发明公开了一种人源白细胞介素6的siRNA、重组表达CAR‑T载体及其构建方法和应用。本发明所述的IL‑6敲减siRNA表达框及其siRNA表达产物，不仅可以应用于CAR19‑T治疗急性B淋巴细胞白血病(ALL)中用于消除或减轻CRS的症状，还可应用于缓解CAR‑T治疗诸如B淋巴瘤、胰腺癌、脑胶质瘤、骨髓瘤等等所有类型肿瘤时引起的CRS症状，甚至还可以应用于缓解其他类型的治疗引起的CRS。

主权项

1.一种包含人源白细胞介素6的siRNA的慢病毒表达载体，其特征在于，所述人源白细胞介素6的siRNA为如SEQ ID NO.43和SEQ ID NO.44所示的核苷酸序列，所述的慢病毒表达载体包括：用于质粒复制的原核复制子pUC Ori序列，如SEQ ID NO.2所示；用于目的菌株大量扩增的含氨苄青霉素抗性基因AmpR序列，如SEQ ID NO.1所示；用于增强真核细胞内的复制的病毒复制子SV40 Ori序列，如SEQ ID NO.3所示；用于慢病毒包装的慢病毒包装顺式元件；用于共同转录表达蛋白质的IRES核糖体结合序列，如SEQ ID NO.12所示；用于嵌合抗原受体基因的真核转录的人EF1α启动子，如SEQ ID NO.15所示；用于组成集识别、传递、启动于一体的二代CAR或三代CAR的抗CD19嵌合抗原受体；用于增强转基因的表达效率的eWPRE增强型土拨鼠乙肝病毒转录后调控元件，如SEQ ID NO.13所示；用于胞内转录siRNA的人RNA聚合酶III启动子hU6，如SEQ ID NO.14所示。