[发明专利]参芪降糖制剂含量测定方法及其在整体质量控制中的应用

摘要

本发明提供了一种参芪降糖制剂含量测定方法，所述方法测定的是参芪降糖制剂中10个活性成分的含量：人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、黄芪甲苷、五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲、五味子醇乙；本发明以化合物降糖活性为导向检测复方中的多种活性物质，能够更好的反应整个复方制剂的质量水平；同时，选取Q‑MS离子监测模式进行含量测定，质谱定量准确性高、专属性强、灵敏度高，优于传统HPLC分析方法；根据本发明方法得到的不同批次参芪降糖制剂液相图构建了指纹图谱，进行相似度评价，更科学全面的评价参芪降糖制剂产品的内在质量，为建立更高水平的质量标准提供依据。

主权项

1.一种参芪降糖制剂含量测定方法，其特征在于，所述方法测定的是参芪降糖制剂中10个活性成分的含量，所述的10个活性成分分别为：人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、黄芪甲苷、五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲、五味子醇乙，所述方法包括如下步骤：(1)制备混合对照品溶液分别称取对照品：人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、黄芪甲苷、五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲、五味子醇乙，以甲醇为溶剂，配制成混合对照品溶液母液；(2)制备内标物标准溶液称取内标物丹参酮IIA，以甲醇为溶剂，配制成内标物标准溶液；(3)制备供试品溶液将参芪降糖制剂粉碎，称取粉碎后的参芪降糖制剂粉末与甲醇混合，超声提取，提取液减压蒸除溶剂，得到浸膏；将所得浸膏加水溶解，再用水饱和正丁醇溶液萃取，收集萃取液减压蒸除溶剂，冷冻干燥，得到参芪降糖制剂提取物；以甲醇为溶剂，配制所得参芪降糖制剂提取物溶液，离心，取上清液，过微孔滤膜，得到供试品溶液；(4)供试品检测采用HPLC‑Q‑MS仪器，在步骤(3)制备的供试品溶液中加入步骤(2)制备的内标物标准溶液，进样检测，得到供试品的质谱图；所述HPLC‑Q‑MS仪器的工作参数条件如下：液相色谱分离条件为：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，粒径≤5μm，流动相A为乙腈，流动相B为体积分数0.1％的甲酸水溶液，采用梯度洗脱，柱温30℃，流速1.0mL/min，进样体积20μL，检测波长为203nm；单四级杆质谱条件为：采用ESI电喷雾离子源，电压：3000V，雾化室温度350℃，干燥气流速12.0L/min，正离子模式，SIM离子监测模式，开启离子监测通道1、离子监测通道2；液相色谱分离梯度洗脱的洗脱溶剂按如下时间顺序进行，表中的百分号的含义为体积百分数：；(5)绘制标准曲线取步骤(1)配制的混合对照品溶液母液，按照不同浓度梯度稀释成若干份混合对照品溶液试样，在每份混合对照品溶液试样中加入步骤(2)制备的内标物标准溶液，然后采用HPLC‑Q‑MS仪器，按照步骤(4)中的工作参数条件进行检测，得到混合对照品的质谱图；以混合对照品中各个单一对照品各自的进样浓度为横坐标，质谱图中各个单一对照品各自对应的峰面积与内标物峰面积的比值为纵坐标，绘制标准曲线，进而得到线性回归方程，即分别得到对照品人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、黄芪甲苷、五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲、五味子醇乙的标准曲线与线性回归方程；(6)供试品含量检测结果将步骤(4)测得的供试品质谱图中各个活性成分化合物各自相应峰面积与内标物峰面积的比值代入步骤(5)中得到的各对照品的线性回归方程，计算得到供试品溶液中人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、黄芪甲苷、五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲、五味子醇乙的含量，进而计算得到参芪降糖制剂中10种活性成分的含量。