[发明专利]一种基于荧光能量共振转移法的GFAP检测方法有效
| 申请号： | 201610934223.4 | 申请日： | 2016-10-31 |
| 公开（公告）号： | CN106568750B | 公开（公告）日： | 2019-12-03 |
| 发明（设计）人： | 闫亚平;秦李娜;李科 | 申请（专利权）人： | 陕西脉元生物科技有限公司 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64;G01N33/68 |
| 代理公司： | 61200 西安通大专利代理有限责任公司 | 代理人： | 王霞<国际申请>=<国际公布>=<进入国 |
| 地址： | 710065 陕西省西安市高新区*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于荧光能量共振转移法的GFAP检测方法，用纯化的人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)，再与Alexa Fluor488标记的以及Alexa Fluor594标记的GFAP抗体结合，形成抗体‑抗原‑两个荧光标抗体复合物，利用FRET原理用荧光酶标仪测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)浓度。由于用到了三个抗体同时识别，特异性更高，准确性更好，并比现有方法检测时间大大缩短。为临床诊断提供了参考信息，有助于临床医生诊断和评估脑卒中进展情况，改善病人的预后。 | ||
| 搜索关键词： | 神经胶质纤维酸性蛋白 抗体 胶质纤维酸性蛋白 抗体复合物 荧光酶标仪 标准曲线 参考信息 固相抗体 抗体包被 抗体结合 临床医生 临床诊断 荧光能量 脑卒中 人神经 微孔板 吸光度 荧光标 转移法 预后 检测 抗原 共振 微孔 诊断 评估 | ||
【主权项】：
1.一种用于非诊断目的基于荧光能量共振转移法的GFAP检测方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1）采集待检测全血样品的血清；/n2）用纯化的神经胶质纤维酸性蛋白抗体包被微孔板，制成固相抗体；/n3）向包被抗体的微孔中加入神经胶质纤维酸性蛋白，然后再与Alexa Fluor488以及Alexa Fluor594标记的神经胶质纤维酸性蛋白抗体结合，形成抗体-抗原-两个荧光标记抗体复合物；/n4）利用荧光能量共振转移法，用酶标仪测定抗体-抗原-两个荧光标记抗体复合物的吸光度，然后通过标准曲线计算出待检测全血样品中GFAP的浓度；/n其中，步骤2）中，是将抗神经胶质纤维酸性蛋白抗体按1:200倍进行稀释，然后每孔加入100μl，于4℃过夜包被，制得固相抗体；/n步骤3）中，每孔加入1:200倍稀释的Alexa Fluor488以及Alexa Fluor594标记的神经胶质纤维酸性蛋白抗体100μl，加上覆膜，于37℃温育30min。/n
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