[发明专利]一种基于便携式血糖仪检测凝血酶的纸分析器件的构建

摘要

本发明公开了一种基于便携式血糖仪检测凝血酶的纸分析器件的构建。在计算机上利用Adobe illustrator CS4软件设计微流控纸芯片的疏水蜡打印图案；在纸芯片亲水工作区域生长金纳米粒子，负载含有凝血酶适配体链的发卡形结构探针，捕获目标物；蔗糖酶标记的识别链和发卡结构打开的探针杂交，利用蔗糖酶对蔗糖的催化水解作用产生葡萄糖，进而通过便携式血糖仪实现对凝血酶的检测。

主权项

一种基于便携式血糖仪检测凝血酶的纸分析器件的构建方法，其特征是包括以下步骤：1.1在计算机上利用Adobe illustrator CS4软件设计微流控纸芯片的疏水蜡打印图案，设计的纸芯片是尺寸边长为20 mm 的正方形，亲水性工作区域是直径为8 mm的圆形；1.2将步骤1.1中设计的打印图案通过蜡打印机打印在色谱纸上，随后将打印过的A4色谱纸放置到平板加热器或烘箱中，在100 ºC下加热100 s，使蜡融化并浸透整个纸的厚度，形成疏水墙；1.3对步骤1.2中获得的纸芯片的亲水区域功能化，步骤为：（1）合成金纳米种子：量取100 mL二次水置于单口烧瓶中，加热到96℃，随后加入1 mL 1wt% 氯金酸溶液，反应1min后，加入3.5 mL 1wt% 柠檬酸钠溶液，继续搅拌12‑18 min至溶液变为酒红色；（2）配制生长溶液：称取0.0139g盐酸羟胺溶于1 mL 水后放置于4 ºC下待用；量取667 μL 1wt% 氯金酸溶液放置于4 ºC下待用；（3）功能化纸芯片亲水区域：移液枪量取100 μL 合成的金纳米种子滴于亲水区域，自然干燥，重复5次，二次水洗净后将配置好的生长溶液迅速混合，随后将混合后的溶液加到滴有金纳米种子的亲水工作区域，反应10 min后二次水清洗，备用；1.4在步骤1.3中所得到金纳米粒子修饰的工作区域上固定5′端带有巯基的适配体链，随后采用牛血清白蛋白封闭非特异性结合位点，使用浓度为0.01 M、pH 7.4的磷酸缓冲溶液清洗，备用；滴加20 µL 待检测的凝血酶溶液，孵育35 min 后用磷酸缓冲溶液清洗；滴加20 µL 蔗糖酶标探针孵育45 min后用磷酸缓冲溶液清洗；滴加60 µL 浓度为1 M的蔗糖溶液，反应1 h, 备用；1.5用便携式血糖仪相匹配的试纸条置于步骤1.4所得的溶液上，吸收至血糖仪要求刻度，插入便携式血糖仪进行检测。