[发明专利]一种用于凝血酶检测的纸基适体荧光传感器的构建

摘要

本发明公开了用于凝血酶检测的纸基适体荧光传感器的构建。在计算机上利用Adobe illustrator CS4软件设计微流控纸芯片的疏水蜡打印图案；在纸芯片工作区域生长金铂双金属降低背景荧光信号；修饰适配体1于金钯双金属上用于特异性识别目标物；通过适配体2对凝血酶的特异性结合，荧光标记物被引入到工作区域，进而通过荧光仪实现对凝血酶的检测。

主权项

一种用于凝血酶检测的纸基适体荧光传感器的构建方法，其特征是包括以下步骤：1.1在计算机上设计纸芯片疏水蜡打印图案，纸芯片疏水蜡打印图案由两个边长为20mm的正方形组成，两个正方形并排呈现且中间存在1mm宽的折叠区，左侧正方形的左上角和右下角分别是直径为8mm的圆形亲水孵化区域和工作区域，右侧正方形的右上角和左下角分别是两个直径为8mm的圆形孔洞区，折叠区处折叠后与左侧圆形区域刚好重叠；1.2将步骤1.1中设计的打印图案通过蜡打印机打印在已裁剪为A4大小的色谱纸上，然后将带有蜡图案的A4色谱纸通过加热到125ºC的平板加热器加热2 min，使蜡融化并浸透整个纸的厚度，形成疏水墙，得到用于荧光测定的工作区域和用于荧光标记物和适配体反应的孵化区域；1.3将步骤1.2中得到的色谱纸的工作区域进行功能化，生长AuPt双金属后进行适配体1的修饰，滴加50 μL待检测的凝血酶，反应45 min后用磷酸缓冲溶液清洗，然后用牛血清白蛋白封锁非活性位点；1.4在步骤1.2中得到的色谱纸的孵化区域滴40 μL合成好的QDs@ZnO荧光标记物和 60 μL的1 µM适配体2，进行荧光标记物和适配体2的反应；1.5将纸芯片沿着折叠线折叠，连有适配体2的荧光标记物QDs@ZnO到达含有目标物的工作区域，反应30 min后用磷酸缓冲溶液洗涤；1.6将步骤1.5中纸芯片工作区域放入荧光设备中，在340 nm的激发波长下进行荧光测定，绘制荧光强度与凝血酶的浓度关系，实现对凝血酶的精确检测。