[发明专利]一种梵净山冷杉纤维素降解菌的筛选方法

摘要

本发明公开了一种梵净山冷杉纤维素降解菌的筛选方法，该方法中初选培养基采用梵净山冷杉针叶、枯枝以及树皮作为碳源，制作的梵净山冷杉纤维素降解菌克服现有的维素降解菌污染率高、生长周期长、工艺复杂的问题，使得工艺简便、菌种纯、污染少、操作简单、周期短。本发明缩短了林地覆盖物降解周期，提高梵净山冷杉林土壤孔隙度10～12％，提高土壤团聚体5～8％，增加土壤含水量5～7％，降低土壤容重8％，降低生产成本20％，促进梵净山冷杉的自然扩繁与天然更新。本发明的方法可实现梵净山冷杉纤维素降解菌的规模化、产业化生产，为贵州省特有物种‑梵净山冷杉的保育与扩繁提供一条新路。

主权项

一种梵净山冷杉纤维素降解菌的筛选方法，其特征在于包括以下步骤：(1)初选培养基制备：按重量份数计算，将粉碎的梵净山冷杉针叶50～80份、梵净山冷杉枯枝60～80份、梵净山冷杉树皮70～90份、胰蛋白胨6～8份、维生素B60.000025～0.000035份、磷酸氢二钾0.50～0.70份，氯化钠0.55～0.65份、硫酸镁0.50～0.60份、氯化钙0.55～0.65份、牛肉浸膏0.55～0.70份以及氯霉素0.008～0.010份加水定容至1000份，控制pH值为5.0～6.0，在110～130℃下用压力为0.1～0.15Mpa的高压蒸汽灭菌25～30min，然后置于24～28℃恒温培养箱培养24h，获得无菌生长初选培养基留存备用；(2)分离培养基制备：按重量份数计算，将梵净山冷杉针叶150～200份洗净以及切成块状的去皮马铃薯150～200份加入1000份水中，煮沸30～40min，用纱布滤去梵净山冷杉针叶和马铃薯残渣得滤液，在滤液中加入蔗糖15～25g和琼脂15～20g，然后加水定容至1000份，控制pH值为5.0～6.0，在110～130℃下用压力为0.1～0.15Mpa的高压蒸汽灭菌25～30min，然后置于24～28℃恒温培养箱培养24h，获得无菌生长的分离培养基留存备用；(3)纤维素降解菌筛选：将初选培养基及接种工具入超净工作台中，采用紫外灯灭菌30min，然后取腐熟梵净山冷杉林地覆盖物20～30g放入初选培养基中；(4)菌种培养：将接种好的初选培养基置于28℃、110～130r/min的菌种培养摇床中培养6～8天；(5)菌种纯化：挑取形成黄色的粘稠发酵液，表面为球形，中间隆起，表面光滑湿润的较大菌落，用接种环取一环划线于分离平板培养基上25～30℃恒温培养24～36h，直至形成单菌落，再将获得单菌落的纤维素降解菌转接在PDA斜面培养基上，以便备用，每3月转接一次，作为传代菌种。